Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 76 trang
Dung lượng: 980 KB

Giới thiệu nội dung

Nghiên cứu thiết kế, biểu hiện, tinh sạch và đánh giá hoạt tính sinh miễn dịch của kháng nguyên H5 Virus-Like Particle từ virus cúm A/H5N6 trên cây thuốc lá Nicotiana benthamiana Domin

Tác giả: Trịnh Thái Vy

Lĩnh vực: Sinh học thực nghiệm

Nội dung tài liệu:

Luận văn thạc sĩ này tập trung vào việc nghiên cứu thiết kế, biểu hiện, tinh sạch và đánh giá hoạt tính sinh miễn dịch của kháng nguyên H5 Virus-Like Particle (VLP) từ virus cúm A/H5N6. Nghiên cứu sử dụng mô hình biểu hiện protein tái tổ hợp tạm thời trên cây thuốc lá Nicotiana benthamiana Domin với mục tiêu sản xuất vắc-xin số lượng lớn, nhanh chóng và hiệu quả. Đề tài nhấn mạnh tiềm năng của vắc-xin VLP từ thực vật trong việc phòng chống dịch cúm gia cầm, một bệnh truyền nhiễm cấp tính gây thiệt hại kinh tế nghiêm trọng.

Mục lục chi tiết:

  • Lời cam đoan
  • Lời cảm ơn
  • Mục lục
  • Danh mục các kí hiệu và chữ viết tắt
  • Danh mục các hình vẽ, đồ thị
  • Danh mục các bảng
  • Mở đầu
    • Mục tiêu nghiên cứu
    • Nội dung nghiên cứu
    • Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài
  • Chương 1: Tổng quan tài liệu
    • 1.1. Giới thiệu về bệnh cúm gia cầm
      • 1.1.1. Lịch sử hình thành và bùng phát dịch bệnh trên thế giới
      • 1.1.2. Thực trạng bệnh cúm gia cầm tại Việt Nam
      • 1.1.3. Đặc điểm dịch tễ của bệnh cúm gia cầm
    • 1.2. Tổng quan về tác nhân gây bệnh cúm gia cầm – Virus cúm A
      • 1.2.1. Cấu trúc đặc trưng của virus gây bệnh cúm gia cầm
        • 1.2.1.1. Phân loại virus cúm
        • 1.2.1.2. Cấu trúc của hạt virus cúm A và thành phần hệ gene
      • 1.2.2. Phương thức lây truyền của virus cúm A
      • 1.2.3. Phân loại các chủng cúm A đã xuất hiện trên thế giới
    • 1.3. Các biện pháp phòng dịch cúm gia cầm hiện nay
      • 1.3.1. Những đóng góp trong phòng bệnh cúm gia cầm của vắc-xin
      • 1.3.2. Tiềm năng sản xuất vắc-xin thực vật từ hạt giả virus (VLP)
  • Chương 2: Đối tượng và phương pháp nghiên cứu
    • 2.1. Đối tượng nghiên cứu
    • 2.2. Phương pháp nghiên cứu
      • 2.2.1. Phương pháp thu thập thông tin lựa chọn gen mã hóa protein H5, tối ưu mã biểu hiện
      • 2.2.2. Thiết kế các cấu trúc vector biểu hiện mang gen mã hóa kháng nguyên H5-VLP, kháng nguyên H5-GCN4pII, kháng nguyên H5-GCN4pII-tp và tạo chủng Agrobacterium tumefaciens mang vector tương ứng
        • 2.2.2.1. Phương pháp tạo cấu trúc vector biểu hiện mang gen mã hóa kháng nguyên H5-VLP
        • 2.2.2.2. Phương pháp tạo cấu trúc vector biểu hiện mang gen mã hóa kháng nguyên H5 dạng trimer pII và H5 dạng oligomer pII-tp
        • 2.2.2.3. Phương pháp tạo chủng khuẩn Agrobacterium tumefaciens mang vector chuyển gen pCB301 tương ứng
      • 2.2.3. Phương pháp biểu hiện tạm thời kháng nguyên tái tổ hợp ở thực vật bằng agroinfiltration
      • 2.2.4. Đánh giá mức độ biểu hiện của protein tái tổ hợp bằng phương pháp điện di SDS-PAGE và Western blot
      • 2.2.5. Tinh sạch kháng nguyên tái tổ hợp H5-VLP, H5-GCN4pII và H5-GCN4pII-tp
      • 2.2.6. Phương pháp đánh giá đặc điểm cấu trúc và hoạt tính sinh học của protein kháng nguyên tinh sạch H5 tái tổ hợp
        • 2.2.6.1. Xác định đặc điểm cấu trúc protein bằng phương pháp Size exclusion chromatography (SEC)
        • 2.2.6.2. Đánh giá hoạt tính sinh học của kháng nguyên H5 tái tổ hợp bằng phản ứng ngưng kết hồng cầu
      • 2.2.7. Phương pháp gây đáp ứng miễn dịch trên chuột
      • 2.2.8. Đánh giá tính sinh miễn dịch tạo kháng thể đặc hiệu trên chuột bằng phản ứng ELISA gián tiếp
      • 2.2.9. Phương pháp xử lý thống kê
  • Chương 3: Kết quả và thảo luận
    • 3.1. Thiết kế các cấu trúc vector tách dòng và vector biểu hiện mang gen mã hóa kháng nguyên H5-VLP, kháng nguyên H5-GCN4pII, H5-GCN4pII-tp và tạo chủng Agrobacterium tumefaciens mang vector tương ứng
      • 3.2.1. Tổng hợp nhân tạo gen mã hoá kháng nguyên H5 của virus cúm A/H5N6 gây bệnh ở Việt Nam
      • 3.2.2. Tạo chủng Agrobacterium mang vector biểu hiện mã hóa kháng nguyên H5-VLP
      • 3.2.3. Tạo chủng Agrobacterium mang vector biểu hiện mã hóa kháng nguyên H5-GCN4pII và kháng nguyên H5-GCN4pII-tp
    • 3.2. Biểu hiện tạm thời của các kháng nguyên H5 (H5N6) tái tổ hợp trên cây thuốc lá Nicotiana benthamiana bằng agroinfiltration
    • 3.3. Tinh sạch protein tái tổ hợp H5 trimer, oligomer và H5-VLP
      • 3.3.1. Tinh sạch kháng nguyên H5 dung hợp cấu trúc pII và pII-tp bằng sắc kí ái lực kim loại cố định (IMAC)
      • 3.3.2. Tinh sạch kháng nguyên H5-VLP
    • 3.4. Đánh giá hoạt tính sinh miễn dịch của kháng nguyên tái tổ hợp H5 trên chuột thí nghiệm
      • 3.4.1. Đánh giá khả năng kích thích sản sinh kháng thể IgG đặc hiệu bằng phản ứng ELISA và Western blot
      • 3.4.2. Đánh giá khả năng kích thích sản sinh kháng thể đặc hiệu bằng phản ứng ức chế ngưng kết hồng cầu (HI)
  • Kết luận và kiến nghị
  • Danh mục tài liệu tham khảo
  • Phụ lục