Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 78 trang
Dung lượng: 918 KB

Giới thiệu nội dung

TẠO GIỐNG LÚA KITAAKE TĂNG CƯỜNG BIỂU HIỆN HOẶC BẤT HOẠT GEN ANKI, ANK2 LIÊN QUAN ĐẾN CẤU TRÚC BÔNG

Tác giả: Lê Thị Như

Lĩnh vực: Sinh học

Nội dung tài liệu:

Đề tài “Tạo giống lúa Kitaake tăng cường biểu hiện hoặc bất hoạt gen ANK1, ANK2 liên quan đến cấu trúc bông lúa” tập trung nghiên cứu chức năng của hai gen ANK1 và ANK2, được phát hiện có liên quan đến cấu trúc bông lúa. Cấu trúc bông lúa là một tính trạng nông học quan trọng, ảnh hưởng trực tiếp đến năng suất. Nghiên cứu này nhằm mục đích thiết kế vector để tăng cường biểu hiện gen ANK1, ANK2 và chuyển thành công vào giống lúa Kitaake, cũng như thiết kế cấu trúc Polycistronic tRNA-gRNA (PTG) để bất hoạt gen ANK1, ANK2 bằng công nghệ CRISPR/Cas9 và chuyển vào giống lúa Kitaake. Cuối cùng, đề tài sẽ chọn lọc các dòng lúa chuyển gen đơn bản, đồng hợp tử và đánh giá mức độ biểu hiện gen cũng như đột biến gen trong cây chuyển gen. Nghiên cứu này kỳ vọng đóng góp vào việc nâng cao năng suất lúa gạo, một mục tiêu quan trọng cho an ninh lương thực toàn cầu.

Mục lục chi tiết:

  • MỞ ĐẦU
  • CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN
    • 1.1. Cấu trúc bông lúa
      • 1.1.1 Cấu trúc bông và sự hình thành bông từ các mô phân sinh
      • 1.1.2 Các nghiên cứu về cơ sở di truyền kiểm soát cấu trúc bông lúa
    • 1.2 Phương pháp phân tích liên kết trên toàn hệ gen (GWAS), công cụ hữu hiệu để nghiên cứu cơ sở di truyền của các tính trạng nông học
    • 1.3 Tổng quan về motif ankyrin (ANK), cấu trúc gen ANK1, ANK2 ở lúa
      • 1.3.1 Motif ankyrin
      • 1.3.2 Phân tích tin sinh gen ANK1, ANK2
    • 1.4 Nghiên cứu chức năng gen ở thực vật bằng phương pháp chuyển gen
    • 1.5 Bất hoạt gen bằng công cụ CRISPR/Cas9
      • 1.5.1. Hệ thống CRISPR/Cas9
      • 1.5.2. Chỉnh sửa đa điểm bằng các cấu trúc polycistronic tRNA-gRNA
  • CHƯƠNG 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
    • 2.1. Vật liệu
      • 2.1.1. Vật liệu thực vật
      • 2.1.2. Plasmid
      • 2.1.3. Các chủng vi khuẩn và môi trường nuôi cấy
    • 2.2. Phương pháp
      • 2.2.1. Phương pháp khử trùng hạt
      • 2.2.2. Thiết kế mồi
      • 2.2.3. Tách chiết DNA, RNA, tổng hợp cDNA
      • 2.2.4. Phân lập đoạn trình tự mã hóa gen ANK1, ANK2
      • 2.2.5. Đưa đoạn trình tự mã hóa gen ANK1, ANK2 vào vector pGEM-T Easy
      • 2.2.6. Ghép nối đoạn trình tự mã hóa gen ANK1, ANK2 vào vector PC5300.OE
      • 2.2.7. Thiết kế cấu trúc Polycistronic tRNA-gRNA (PTG) bất hoạt gen ANK1, ANK2
      • 2.2.8. Chuyển gen vào giống lúa Kitaake sử dụng Agrobacterium
      • 2.2.9. Phân tích cây chuyển gen mang cấu trúc tăng cường biểu hiện ANK1, ANK2
      • 2.2.10. Chọc lọc các dòng chuyển gen đột biến bằng công nghệ CRISPR/Cas9
      • 2.2.11. Các kỹ thuật khác
  • CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
    • 3.1. Tạo vector chuyển gen tăng cường biểu hiện gen ANK1, ANK2
      • 3.1.1. Phân lập trình tự mã hóa gen ANK1, ANK2
      • 3.1.2. Nhân dòng trình tự mã hóa gen ANK1, ANK2 vào vector nhân dòng pGEM-T Easy
      • 3.1.3. Ghép nối trình tự mã hóa gen ANK1, ANK2 vào vector PC5300.OE
    • 3.2. Thiết kế cấu trúc PTG nhằm gây đột biến gen ANK1, ANK2 bằng công nghệ CRISPR/Cas9
      • 3.2.1. Tạo các mảnh thành phần mang cấu trúc gRNA gây bất hoạt ANK1, ANK2
      • 3.2.2. Sàng lọc các cấu trúc PTG
    • 3.3. Chuyển gen sử dụng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens
    • 3.4. Chọn lọc các dòng chuyển gen tăng cường biểu hiện gen ANK1, ANK2
      • 3.4.1. Sàng lọc các dòng T0 chuyển gen, đánh giá hiệu quả chuyển gen
      • 3.4.2. Chọn lọc các dòng T1 đồng hợp tử mang một bản sao T-DNA
      • 3.4.3. Đánh giá mức độ biểu hiện của gen ANK1, ANK2 trong các dòng chuyển gen
    • 3.5. Chọn lọc các dòng chuyển gen đột biến gen ANK1, ANK2 bằng công nghệ CRISPR/Cas9
      • 3.5.1. Sàng lọc các dòng chuyển gen T0 mang cấu trúc chuyển gen
      • 3.5.2. Sàng lọc các dòng chuyển gen T0 đột biến gen ANK1, ANK2
      • 3.5.3. Chọn lọc các dòng T1 đột biến đồng hợp
  • KẾT LUẬN
  • KIẾN NGHỊ
  • TÀI LIỆU THAM KHẢO
  • PHỤ LỤC. DANH SÁCH CÁC MÔI TRƯỜNG SỬ DỤNG