Báo cáo khoa học: VEGF gene expression is regulated post-transcriptionally in macrophages

VEGF gene expression is regulated post-transcriptionally in macrophages

Tác giả: Min Du, Kristen M. Roy, Lihui Zhong, Zheng Shen, Hannah E. Meyers, và Ralph C. Nichols

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Miễn dịch học, Y học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá cơ chế điều hòa biểu hiện gen VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor) ở cấp độ sau phiên mã trong tế bào đại thực bào. Các nhà nghiên cứu đã chỉ ra rằng việc kích hoạt đại thực bào làm tăng biểu hiện mRNA và protein VEGF. Nghiên cứu cũng làm rõ vai trò của vùng 3′ UTR (không dịch mã) của mRNA VEGF trong việc điều hòa biểu hiện gen này. Các bằng chứng thu thập được từ các thử nghiệm trên dòng tế bào RAW-264.7 và đại thực bào được kích hoạt bằng thioglycollate cho thấy rằng vùng 3′ UTR có khả năng làm giảm đáng kể biểu hiện của gen báo cáo. Quan trọng hơn, các yếu tố kích hoạt đại thực bào như LPS, axit lipoteichoic và protein VEGF có thể kích thích biểu hiện của các gen báo cáo phụ thuộc vào 3′ UTR. Phân tích chi tiết hơn về vùng 3′ UTR đã xác định được các yếu tố điều hòa quan trọng, bao gồm cả vị trí gắn kết của protein hnRNP L, cho thấy cơ chế điều hòa phức tạp này góp phần vào việc biểu hiện gen VEGF ở đại thực bào.

Mục lục chi tiết:

• VEGF gene expression is regulated post-transcriptionally in macrophages
• Keywords
• Correspondence
• The macrophage is critical to the innate immune response…
• Abbreviations
• Results
• Macrophage-like RAW-264.7 cells produce three VEGF isoforms
• Effects of stimulation of RAW-264.7 cells on VEGF protein
• Effects of stimulation of RAW-264.7 cells on VEGF mRNA
• Effects of AU-rich sequences on reporter activity in macrophages
• The effects of the 3′-untranslated region of mouse VEGF mRNA on gene expression in a heterologous reporter
• Effects of the 3′ UTR of VEGF mRNA on luciferase reporter mRNA levels
• Fig. 3. AU-rich sequences reduce reporter activity.
• Effects of agents that activate macrophages on VEGF-FL-luc reporter activity
• VEGF protein on activation of VEGF-FL-luc reporter activity
• Fig. 4. The effects of the 3′ UTR of VEGF mRNA on reporter expression in macrophages.
• Fig. 5. Mapping of the 3′ UTR from VEGF mRNA.
• Mapping of the 3′ UTR of VEGF mRNA
• The hnRNP L element
• Discussion
• Experimental procedures
• Cell culture, transfection and luciferase assay
• Measurement of VEGF and TNF production by ELISA
• Plasmid construction
• VEGF 3’UTR luciferase reporter constructs
• AURE luciferase constructs
• Obtaining RNA
• RT/PCR
• VEGF mRNA stability
• Statistical analyses
• Acknowledgements
• References