Báo cáo Y học: Ubiquitination of soluble and membrane-bound tyrosine hydroxylase and degradation of the soluble form

Ubiquitination of Soluble and Membrane-Bound Tyrosine Hydroxylase and Degradation of the Soluble Form

Tác giả: Anne P. Døskeland and Torgeir Flatmark

Lĩnh vực: Biochemistry and Molecular Biology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của quá trình ubiquitination trong việc điều hòa chức năng và sự phân hủy của tyrosine hydroxylase (TH), một enzyme quan trọng trong sinh tổng hợp catecholamine. Tài liệu trình bày bằng chứng về việc TH, cả dạng hòa tan tái tổ hợp và dạng liên kết màng, đều là cơ chất của hệ thống enzyme gắn kết ubiquitin. Đặc biệt, TH hòa tan tái tổ hợp đã được chứng minh là trải qua sự phân hủy phụ thuộc ATP thông qua con đường ubiquitin-proteasome trong hệ thống dịch lysate tế bào lưới. Bên cạnh đó, nghiên cứu cũng mô tả sự microheterogeneity của TH tái tổ hợp và dạng liên kết màng của TH bò, cung cấp những hiểu biết sâu sắc về các quá trình điều hòa phức tạp của enzyme này.

Mục lục chi tiết:

• Purification of recombinant hTH1 expressed in E. coli
• Ubiquitination of wt-hTH1 in a reconstituted in vitro system
• Expression and degradation of hTH1 in a coupled transcription-translation reticulocyte lysate system
• MgATP-dependent degradation of wt-hTH1
• Microheterogeneity of wt-hTH1 and bTH as observed by two-dimensional electrophoresis
• Ubiquitination and degradation of hTH1 in the reticulocyte lysate system
• Immunodetection of Ub-TH conjugates in bovine adrenal chromaffin granule ghosts
• Ubiquitination of proteins in the chromaffin granule membrane
• Ubiquitination of the soluble recombinant hTH1
• Energy-dependent degradation of recombinant hTH1 in the in vitro reticulolysate system
• Ubiquitination of proteins in the chromaffin granule membrane