Báo cáo khoa học: The two N-glycans present on bovine Pofut1 are differently involved in its solubility and activity

The Two N-Glycans Present on Bovine Pofut1 Are Differently Involved in Its Solubility and Activity

Tác giả: Céline Loriol, Aymeric Audfray, Fabrice Dupuy, Agnès Germot and Abderrahman Maftah

Lĩnh vực: Genetics, Molecular Biology, Biochemistry

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của hai chuỗi N-glycan trên enzyme Pofut1 (protein O-fucosyltransferase 1) ở bò, tập trung vào ảnh hưởng của chúng đến độ hòa tan và hoạt tính của enzyme. O-fucosylation là một quá trình glycosyl hóa sau dịch mã, thiết yếu cho tín hiệu Notch và sự gấp cuộn protein. Nghiên cứu xác định rằng enzyme Pofut1 ở bò được biểu hiện dưới dạng glycoprotein có hai N-glycan. Thông qua các thí nghiệm biến đổi gen tại chỗ và phân tích biểu hiện protein, các nhà khoa học đã chỉ ra rằng N-glycan ở vị trí N65 đóng vai trò quan trọng trong việc duy trì độ hòa tan và chức năng của Pofut1. Việc mất N-glycan tại vị trí này dẫn đến sự kết tụ protein và suy giảm hoạt tính enzyme. Ngược lại, N-glycan tại vị trí N163 có ảnh hưởng ít hơn đến độ hòa tan và hoạt tính của enzyme.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Keywords
• Correspondence
• Abstract
• O-Fucosylation is a carbohydrate modification of proteins in which fucose is covalently attached to the hydroxyl group of a serine or threonine residue.
• The enzyme responsible for O-fucose linkage on EGF-like repeats is protein O-fucosyltransferase 1 (Pofut1).
• Abbreviations
• O-Fucosylation is a post-translational glycosylation in which an O-fucose is covalently attached to the hydroxyl group of a specific serine or threonine residue.
• O-Fucosylation is a carbohydrate modification of proteins in which fucose is covalently attached to the hydroxyl group of a serine or threonine residue.
• N-linked glycan; Pofut1 expression; protein folding and solubility; protein O-fucosyltransferase 1; site-directed mutagenesis
• The two N-glycans present on bovine Pofut1 are differently involved in its solubility and activity
• Only the first N-glycosylation site on Pofut1 is conserved among bilaterians
• Bovine Pofut1A is detected in all examined tissues as a diglycosylated enzyme
• N-Linked oligosaccharides are required for optimal Pofut1 activity
• The first Pofut1 N-glycan is involved in Pofut1 solubility
• Discussion
• Experimental procedures
• Sequence alignment
• Site-directed mutagenesis
• Expression of wild-type and mutated bovine O-fucosyltransferases in COS-1 cells
• O-Fucosyltransferase assay
• Western blot analysis
• Enzymatic deglycosylation of bovine Pofut1 enzyme
• Acknowledgements
• References