Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 9 trang
Dung lượng: 275 KB

Giới thiệu nội dung

The Tungsten-Containing Formate Dehydrogenase from Methylobacterium Extorquens AM1: Purification and Properties

Tác giả: Markus Laukel, Ludmila Chistoserdova, Mary E. Lidstrom, Julia A. Vorholt

Lĩnh vực: Hóa sinh, Vi sinh vật học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này mô tả việc phân lập và xác định đặc tính của một enzyme formate dehydrogenase (FDH1) chứa tungsten từ vi khuẩn methylotrophic hiếu khí Methylobacterium extorquens AM1. Enzyme này là một heterodimer bao gồm hai tiểu đơn vị. Phân tích cho thấy FDH1 chứa các cofactor sắt-lưu huỳnh, FMN và tungsten, với tỷ lệ khoảng 1.8 mol tungsten trên mỗi mol enzyme. Các gen mã hóa cho hai tiểu đơn vị của FDH1 đã được xác định trên bộ gen của M. extorquens AM1. Phân tích trình tự amino acid của tiểu đơn vị alpha cho thấy sự tương đồng với các tiểu đơn vị xúc tác của các enzyme formate dehydrogenase chứa tungsten và selenocysteine đã biết. Tiểu đơn vị beta dường như là một protein dung hợp chứa các vùng tương đồng với các tiểu đơn vị liên quan đến NADH-ubiquinone oxidoreductase. Enzyme có hoạt tính tối ưu ở pH 8.0-8.5 và có thể khử các chất nhận điện tử nhân tạo như DCPIP và benzyl viologen, nhưng không thể sử dụng FAD, FMN hoặc NADP+. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng M. extorquens AM1 có khả năng vận chuyển tungstate hiệu quả cao và enzyme FDH1 này không nhạy cảm với oxy, một đặc điểm khác thường so với các FDH chứa tungsten được biết đến trước đây.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Vật liệu và phương pháp
    • Sinh vật và điều kiện nuôi cấy
    • Kiểm tra hoạt tính FDH
    • Tinh sạch protein
    • Phân tích trình tự
    • Phương pháp phân tích
    • Phân tích trình tự gene
  • Kết quả và thảo luận
    • Tinh sạch formate dehydrogenase phụ thuộc NAD và xác định các gen mã hóa
    • Phân tích trình tự amino acid
    • Đặc tính