Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 7 trang
Dung lượng: 136 KB

Giới thiệu nội dung

The Kinetic Properties of Various R258 Mutants of Deacetoxycephalosporin C Synthase

Tác giả: Hwei-Jen Lee, Young-Fung Dai, Chia-Yang Shiau, Christopher J. Schofield, Matthew D. Lloyd

Lĩnh vực: Hóa sinh, Dược học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc khảo sát tính chọn lọc của chất nền phụ (cosubstrate) đối với enzyme deacetoxycephalosporin C synthase (DAOCS) thông qua việc tạo ra các biến thể R258 của enzyme này. Enzyme dạng hoang dã (wild-type) có yêu cầu bắt buộc đối với 2-oxoglutarate và không thể sử dụng hiệu quả các 2-oxoacids kỵ nước. Các biến thể R258A, R258L, R258F, R258H và R258K đã được tạo ra và cho thấy khả năng sử dụng các 2-oxoacids kỵ nước. Tuy nhiên, hiệu quả sử dụng 2-oxoglutarate của các biến thể này đều giảm so với enzyme hoang dã, thậm chí bị mất hoàn toàn trong một số trường hợp. Nghiên cứu cũng chỉ ra vai trò thiết yếu của gốc arginine tại vị trí 258 trong việc kiểm soát tính chọn lọc chất nền phụ của DAOCS.

Mục lục chi tiết:

  • Site-directed mutagenesis
  • Protein purification
  • Activity assays
  • Results and discussion
  • Purification and characterization of mutants
  • Activity assays for 2-oxoglutarate and penicillin oxidation
  • Utilization of 2-oxoglutarate by the R258 mutants
  • Penicillin G and ampicillin oxidation in the presence of 2-oxoglutarate
  • Rescue of enzyme activity of R258 mutants by alternative cosubstrates
  • Kinetic parameters of R258 mutants
  • Role of arginine residues in controlling cosubstrate selectivity
  • Acknowledgements
  • References