Báo cáo khoa học: The allene oxide cyclase family of Arabidopsis thaliana – localization and cyclization

The Allene Oxide Cyclase Family of Arabidopsis Thaliana – Localization and Cyclization

Tác giả: Florian Schaller, Philipp Zerbe, Steffen Reinbothe, Christiane Reinbothe, Eckhard Hofmann, Stephan Pollmann

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Hóa sinh thực vật

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào gia đình enzyme allene oxide cyclase (AOC) ở Arabidopsis thaliana, đặc biệt là vai trò của chúng trong quá trình sinh tổng hợp jasmonate. Các nhà khoa học đã điều tra cơ chế phản ứng của AOC2, xác định các vị trí quan trọng trong trung tâm hoạt động và phân tích sự đóng góp của bốn isoenzyme AOC vào quá trình sinh tổng hợp jasmonate. Nghiên cứu cũng làm sáng tỏ vị trí tế bào của các enzyme này, cho thấy chúng đều được định vị trong lục lạp, điều này ủng hộ khả năng tương tác trực tiếp giữa các enzyme này trong con đường sinh tổng hợp.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results
• Overexpression, purification, and enzymatic characterization of AOC1-AOC4
• Cellular distribution of AOS and AOC1-AOC4
• Substrate-binding site and biochemical analysis of mutated AOC2
• Discussion
• Substrate-binding site and biochemical analysis of mutated AOC2 protein
• Comparison of AOC1-AOC4 and their physiological functions
• Experimental procedures
• Protein expression and purification
• Purification of inclusion bodies and refolding
• Gel electrophoresis and protein immunoblotting
• Generation of polyclonal AOC-specific antibodies
• Production of plant expression vectors for fluorescence analysis
• Protein import in vitro
• Transient expression in planta and microscopic techniques for fluorescence analysis
• Generation of site-directed mutants of AOC2
• CD spectroscopy
• Substrate preparation
• Determination of total enzymatic activity via chiral capillary GC-MS
• Acknowledgements
• References
• Supplementary material