Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 9 trang
Dung lượng: 199 KB

Giới thiệu nội dung

Substrate Selectivity and Sensitivity to Inhibition by FK506 and Cyclosporin A of Calcineurin Heterodimers Composed of the α or β Catalytic Subunit

Tác giả: Brian A. Perrino, Andrew J. Wilson, Patricia Ellison, and Lucie H. Clapp

Lĩnh vực: Sinh hóa học, Dược lý học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khảo sát đặc tính xúc tác của enzyme calcineurin (CaN) khi được cấu thành từ các tiểu đơn vị xúc tác α hoặc β. Các kết quả cho thấy, CaN chứa tiểu đơn vị α có ái lực với cơ chất thấp hơn và tốc độ phản ứng tối đa cao hơn so với CaN chứa tiểu đơn vị β đối với các peptit đã phosphoryl hóa và p-nitrophenylphosphate. Mặc dù cả hai dạng CaN đều cho thấy tốc độ phân ly calmodulin giống nhau, nhưng có sự khác biệt về độ nhạy cảm với các chất ức chế như peptide tự ức chế CaN (CaP) và phức hợp cyclophilin A/cyclosporin A (CyPA/CsA). Đặc biệt, CaN chứa tiểu đơn vị α nhạy cảm hơn với sự ức chế bởi FKBP12/FK506 khi sử dụng cơ chất peptit đã phosphoryl hóa. Những khác biệt về chức năng này giữa hai dạng tiểu đơn vị xúc tác α và β của CaN cho thấy tỷ lệ CaNα:CaNβ trong tế bào hoặc mô có thể quyết định mức độ hoạt động phosphatase của CaN đối với các cơ chất cụ thể.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Quy trình thực nghiệm
  • Nguyên liệu
  • Biểu hiện và tinh sạch CaNa và CaNβ tái tổ hợp
  • Định lượng hoạt tính phosphatase
  • Định lượng hằng số tốc độ
  • Kết quả
  • Biểu hiện và tinh sạch CaNa và CaNβ
  • Định lượng hoạt tính phosphatase của CaNa và CaNβ
  • Hình 1. Phân tích SDS/PAGE và Western blot của CaN biểu hiện từ thể thực khuẩn
  • Hình 2. Phân tích động học hoạt tính phosphatase của CaN dị thể
  • Ức chế hoạt tính phosphatase của CaNa và CaNβ bởi CaP
  • Hình 3. Ức chế dị thể CaN
  • Ức chế hoạt tính phosphatase của CaNa và CaNβ bởi FKBP12/FK506 hoặc CypA/CsA
  • Hình 4. Ức chế dị thể CaN
  • Kích thích hoạt tính phosphatase của CaNa và CaNβ bởi FKBP12/FK506 đối với pNPP
  • Hình 5. Kích thích hoạt tính phosphatase của CaN
  • Xác định các hằng số tốc độ phân ly giữa CaM(C75)ACR và CaNa hoặc CaNβ
  • Hình 6. Đo hằng số tốc độ phân ly CaM
  • Thảo luận
  • Bảng 1. Tóm tắt các thông số động học của hoạt tính phosphatase CaNa và CaNβ đối với ba cơ chất
  • Tài liệu tham khảo