Báo cáo khoa học: Spectroscopic characterization of the oxyferrous complex of prostacyclin synthase in solution and in trapped sol–gel matrix

Spectroscopic Characterization of the Oxyferrous Complex of Prostacyclin Synthase in Solution and in Trapped Sol-Gel Matrix

Tác giả: Hui-Chun Yeh, Pei-Yung Hsu, Ah-Lim Tsai, and Lee-Ho Wang

Lĩnh vực: Hóa sinh, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc đặc trưng hóa phức hợp oxyferrous của enzyme prostacyclin synthase (PGIS), một thành viên của họ cytochrome P450. Các nhà nghiên cứu đã phát triển một phương pháp sử dụng kỹ thuật sol-gel để ổn định phức hợp oxyferrous của PGIS, vốn thường không bền vững trong dung dịch. Việc đóng gói enzyme vào ma trận silica đã cho phép quan sát phức hợp này trong thời gian dài hơn ở nhiệt độ phòng, với những thay đổi phổ hấp thụ đáng kể so với trạng thái trong dung dịch. Nghiên cứu cũng xem xét khả năng liên kết với các ligand khác nhau và hoạt tính peroxidase của PGIS được bao bọc trong sol-gel, cho thấy sự giảm đáng kể hoạt độ do giới hạn khuếch tán của chất nền. Kết quả này mở ra tiềm năng ứng dụng kỹ thuật sol-gel để nghiên cứu các chất trung gian không bền vững trong chu trình phản ứng của các enzyme P450 khác.

Mục lục chi tiết:

• Spectroscopic characterization of the oxyferrous complex of prostacyclin synthase in solution and in trapped sol-gel matrix
• Keywords
• Correspondence
• Oxyferrous complex of PGIS
• Results and Discussion
• Formation and decay of oxyferrous PGIS complex in solution
• UV/VIS spectra of ligand binding of PGIS in solution and in sol-gel monolith
• Peroxidase reactivity of PGIS in solution and sol-gel
• Binding of O₂ to PGIS in the sol-gel monolith
• Binding of CO to PGIS in sol-gel monolith
• Experimental procedures
• Materials
• Preparation of sol-gel-encapsulated PGIS
• Ligand binding
• Stopped-flow kinetic measurements
• Preparation of O₂-bound ferrous PGIS monoliths
• Peroxidase activity
• Acknowledgements
• References