Báo cáo khoa học: Purification of a plant nucleotide pyrophosphatase as a protein that interferes with nitrate reductase and glutamine synthetase assays

Purification of a Plant Nucleotide Pyrophosphatase as a Protein That Interferes with Nitrate Reductase and Glutamine Synthetase Assays

Tác giả: Greg B. G. Moorhead, Sarah E. M. Meek, Pauline Douglas, Dave Bridges, Catherine S. Smith, Nick Morrice and Carol Mackintosh

Lĩnh vực: Biochemistry, Protein Phosphorylation

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc tinh chế một protein từ chiết xuất súp lơ (Brassica oleracea var. botrytis) có hoạt tính ức chế cả glutamine synthetase (GS) và nitrate reductase (NR). Quá trình tinh chế cuối cùng đã xác định được một acyl-CoA oxidase và một protein thuộc họ nucleotide pyrophosphatase. Protein này có khả năng thủy phân NADH, ATP và FAD thành AMP, đồng thời bị ức chế bởi fluoride, Cu²⁺, Zn²⁺ và Ni²⁺. Nghiên cứu cho thấy rằng hoạt tính ức chế đối với NR và GS có thể được giải thích bởi sự thủy phân các chất nền nucleotide của nucleotide pyrophosphatase, chứ không phải do nó là một yếu tố điều hòa sinh lý cụ thể. Điều này có thể làm sáng tỏ sự nhầm lẫn trong các nghiên cứu trước đây về ảnh hưởng của nucleotide và các yếu tố protein đối với NR và GS trong ống nghiệm.

Mục lục chi tiết:

• Purification of a nitrate reductase/glutamine synthetase inhibitor protein
• Enzyme assays
• Amino acid sequencing
• Results
• Properties of a nitrate reductase inhibitor
• Identification and purification of a GS inhibitor with identical properties to the NR inhibitor
• Discussion