Proteomic and biochemical analysis of 14-3-3-binding proteins during C2-ceramide-induced apoptosis

Proteomic and Biochemical Analysis of 14-3-3-Binding Proteins During C2-Ceramide-Induced Apoptosis

Tác giả: Mercedes Pozuelo-Rubio

Lĩnh vực: Proteomics, C2-ceramide, Hela cells, Apoptosis, 14-3-3 proteins

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích protein tương tác với 14-3-3 trong điều kiện sinh lý và khi cảm ứng apoptosis bởi C2-ceramide. Phương pháp sắc ký ái lực 14-3-3 đã xác định các protein gây chết tế bào theo chương trình như thụ thể tương tác protein 3 và chất đối kháng/chất diệt protein Bcl-2 là các protein mới liên kết với 14-3-3 phụ thuộc vào quá trình phosphoryl hóa trong điều kiện sinh lý. Chất cảm ứng apoptosis C2-ceramide đã thúc đẩy sự suy giảm tín hiệu liên kết 14-3-3 của các chiết xuất tế bào. Nghiên cứu về vai trò của 14-3-3 trong quá trình C2-ceramide gây apoptosis cho thấy việc giảm biểu hiện của các isoform 14-3-3 làm tăng nhạy cảm của tế bào với cái chết, trong khi việc tăng biểu hiện của các isoform này lại làm chậm quá trình chết. Các kỹ thuật tinh sạch ái lực kép kết hợp với sắc ký lỏng-khối phổ song song đã xác định 15 protein liên quan đến quá trình sống sót của tế bào mà trạng thái liên kết 14-3-3 của chúng thay đổi trong quá trình C2-ceramide gây apoptosis. Trong điều kiện sinh lý, desmin được xác định rõ ràng là một protein tương tác mới với 14-3-3. Các protein như vasodilator-stimulated phosphoprotein, nucleophosmin và calmodulin, có khả năng liên kết 14-3-3 đã được đề xuất trước đó dựa trên phân tích khối phổ, nay đã được xác nhận là các protein liên kết 14-3-3 phụ thuộc phosphoryl hóa. Đáng chú ý, các protein liên quan đến điều hòa sửa chữa đứt gãy chuỗi kép DNA trong giai đoạn đầu của apoptosis, cũng như điều hòa sự co rút của tế bào trong quá trình apoptosis, đã được xác định là các protein liên kết 14-3-3 có sự thay đổi trạng thái liên kết khi apoptosis bắt đầu. Sự đa dạng chức năng của các protein được xác định này cho thấy 14-3-3 có thể điều hòa quá trình apoptosis thông qua các cơ chế mới, bên cạnh các cơ chế đã biết.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Kết quả
• Bàn luận