Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 7 trang
Dung lượng: 155 KB

Giới thiệu nội dung

Phenol hydroxylase from Acinetobacter radioresistens S13: Isolation and characterization of the regulatory component

Tác giả: Ersilia Griva, Enrica Pessione, Sara Divari, Francesca Valetti, Maria Cavaletto, Gian Luigi Rossi, and Carlo Giunta

Lĩnh vực: Biochemistry, Molecular Biology

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này trình bày việc phân lập và đặc tính hóa thành phần điều hòa của enzyme phenol hydroxylase đa thành phần từ Acinetobacter radioresistens S13. Enzyme này bao gồm ba thành phần: oxygenase (PHO), reductase (PHR) và thành phần điều hòa (PHI). PHI đóng vai trò quan trọng trong xúc tác chuyển hóa phenol thành catechol, mặc dù không cần thiết cho hoạt động của PHR với các chất nhận electron thay thế. PHI có khối lượng phân tử nhỏ, không chứa đồng yếu tố oxy hóa khử và không liên kết với các đầu dò kỵ nước. Chuỗi N-terminal của PHI có tương đồng với các protein điều hòa của các enzyme phenol hydroxylase khác. Trong hệ thống tái tổ hợp, tỉ lệ tối ưu cho tốc độ phản ứng là 2 phân tử PHR : 1 dimer PHI : 1 dimer PHO. PHI tương tác đặc hiệu với PHR, làm tăng cường tín hiệu huỳnh quang của FAD, cho thấy sự thay đổi cấu trúc của PHR giúp căn chỉnh tốt hơn với PHO.

Mục lục chi tiết:

  • Introduction
  • Materials and methods
  • Bacterial strain
  • Culture conditions
  • Preparation of crude extract
  • Enzyme activity test
  • Protein determination
  • PHI purification
  • Monomers isolation by reverse-phase HPLC
  • Hydrophobic interaction chromatography
  • Molecular mass determination
  • Isoelectric focusing
  • NH2-terminal sequence
  • Optical spectroscopy
  • Metal content
  • Kinetic constants
  • Reconstitution of PH activity ‘in vitro’
  • Results
  • PHI purification
  • Secondary structure and thermal denaturation studies
  • PHI does not interact with phenol
  • PHI is essential for the catalytic activity of the reconstituted PH system
  • PHI is not required for PHR activity towards alternative electron acceptors
  • Discussion
  • References