Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 78 trang
Dung lượng: 870 KB

Giới thiệu nội dung

Phân Lập Và Thiết Kế Vector Biểu Hiện Gen Mã Hóa NAD(P)H: Quinone Oxidoreductase 1 (NQO1) Ở Người

Tác giả: Nguyễn Thị Thanh Nga

Lĩnh vực: Sinh học thực nghiệm

Nội dung tài liệu:

Luận văn thạc sĩ khoa học này tập trung vào việc phân lập và thiết kế vector biểu hiện cho gen mã hóa enzyme NAD(P)H: quinone oxidoreductase 1 (NQO1) ở người. Enzyme NQO1 đóng vai trò quan trọng trong việc bảo vệ tế bào khỏi các tác nhân gây hại, đặc biệt là các hợp chất quinon, bằng cách tham gia vào quá trình khử độc và chống oxy hóa. Nghiên cứu này nhằm mục đích tạo ra vector tái tổ hợp chứa đoạn gen mã hóa enzyme NQO1 và thiết kế vector biểu hiện tạm thời thành công đoạn gen này trong tế bào động vật.

Mục lục chi tiết:

  • Mở đầu
  • Chương 1: Tổng quan tài liệu
    • 1.1. Tổng quan về gen NQO1
      • 1.1.1 Giới thiệu chung về gen NQO1
      • 1.1.2. Cấu trúc gen NQO1
      • 1.1.3 Sự điều hòa NQO1 bởi con đường Keap/Nrf2/ARE.
      • 1.1.4 Đa hình gen NQO1
    • 1.2 Tổng quan về protein NQO1
      • 1.2.1 Vai trò của NQO1
        • a- Các hoạt động chống oxi hóa của NQO1
        • b- Sự bảo vệ chống lại estrogen quinones
        • c- Hướng bảo vệ thần kinh của NQO1
      • 1.2.2 Cấu trúc của phân tử protein NQO1
      • 1.2.3 Các trạng thái liên kết chuyển hóa để ổn định và hoạt hóa protein
    • 1.3. Các hệ thống biểu hiện dùng trong tạo protein tái tổ hợp
    • 1.4. Vector biểu hiện pcDNA3.1 B myc-his B
    • 1.5. Tình hình nghiên cứu trong nước
  • Chương 2: Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
    • 2.1. Vật liệu
    • 2.2. Phương pháp
      • 2.2.1. Tách chiết RNA tổng số
      • 2.2.2. Tổng hợp cDNA
      • 2.2.3. Nhân đoạn cDNA bằng phản ứng PCR.
      • 2.2.4. Phương pháp điện di DNA trên gel agarose.
      • 2.2.5. Xử lý DNA bằng enzyme giới hạn.
      • 2.2.6. Tinh chế các đoạn DNA trên gel agarose.
      • 2.2.7. Ghép nối DNA.
      • 2.2.8. Biến nạp plasmid vào E. coli bằng phương pháp sốc nhiệt
      • 2.2.9. Tách chiết DNA plasmid
      • 2.2.10. Xác định trình tự DNA
      • 2.2.11. Biểu hiện tạm thời DNA plasmid tái tổ hợp vào tế bào động vật.
      • 2.2.12. Phân tích protein bằng kỹ thuật điện di SDS-PAGE.
  • Chương 3. Kết quả và thảo luận
    • 3.1. Sơ đồ thí nghiệm
    • 3.2. Tách chiết RNA tổng số
    • 3.3. Tạo dòng và thiết kế vector biểu hiện gen NQO1
      • 3.3.1 Thiết kế cặp mồi và PCR.
      • 3.3.2 Thiết kế vector tách dòng và biểu hiện pcDNA3.1B-NQO1
      • 3.3.3 Tạo dòng đoạn cDNA mã hóa enzyme NQO1 trong vector pcDNA3.1B.
    • 3.4 Biểu hiện tạm thời DNA plasmid tái tổ hợp trong tế bào động vật
      • 3.4.1 Nuôi cấy ổn định cho tế bào HEK 293.
      • 3.4.2 Chuẩn bị vector pcDNA3.1-NQO1 cho chuyển gen.
      • 3.4.3 Biểu hiện nhanh NQO1 trong tế bào động vật.
  • Kết luận và kiến nghị
  • Tài liệu tham khảo