Luận văn Thạc sĩ Sinh học: Nghiên cứu tạo Biosensor xác định kháng nguyên HER2

Nghiên Cứu Tạo Biosensor Xác Định Kháng Nguyên HER2

Tác giả: Đào Minh Đức

Lĩnh vực: Sinh học

Nội dung tài liệu:
Luận văn Thạc sĩ Sinh học này tập trung vào việc nghiên cứu và chế tạo một Biosensor điện hóa có khả năng xác định kháng nguyên HER2. Kháng nguyên HER2 đóng vai trò quan trọng trong chẩn đoán và điều trị ung thư vú, đặc biệt là ung thư vú dương tính với HER2, vốn có tiên lượng xấu. Nghiên cứu bao gồm hai phần chính: sàng lọc Aptamer đặc hiệu cho HER2 và ứng dụng Aptamer đã sàng lọc để chế tạo Biosensor điện hóa. Biosensor này được kỳ vọng sẽ cung cấp một phương pháp xác định nhanh chóng và chính xác hàm lượng HER2 trong các mẫu sinh học, hỗ trợ đắc lực cho việc chẩn đoán và theo dõi điều trị ung thư vú.

Mục lục chi tiết:

• Lời cảm ơn
• Mục lục
• Danh mục các ký hiệu và các chữ viết tắt
• Danh mục các hình
• Danh mục các bảng
• Mở đầu
• Chương I: Tổng quan tài liệu
• 1.1. Ung thư vú biểu hiện HER2
• 1.1.1. Ung thư vú
• 1.1.2. Thụ thể yếu tố sinh trưởng biểu bì (Human epithelial growth factor receptor – HER2)
• 1.1.2.1. Xác định sự biểu hiện HER2 ở mức ADN
• 1.1.2.2. Xác định sự biểu hiện HER2 ở mức ARN
• 1.1.2.3. Xác định sự biểu hiện HER2 ở mức protein
• 1.2. Biosensor
• 1.2.1. Giới thiệu chung về Biosensor
• 1.2.2. Lịch sử phát triển của Biosensor
• 1.2.3. Đặc điểm – Yêu cầu của Biosensor
• 1.2.4. Nguyên lý hoạt động chung của Biosensor
• 1.2.5. Ứng dụng của Biosensor
• 1.3. Tổng quan về Aptamer
• 1.3.1. Khái niệm
• 1.3.2. Lịch sử
• 1.3.3. Đặc trưng của Aptamer
• 1.3.4. Ưu điểm của Aptamer so với kháng thể
• 1.3.5. Phương pháp thu nhận Aptamer – Phương pháp SELEX (Systematic Evolution of Ligands by Exponential enrichment)
• Chương II: Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
• 2.1. Vật liệu
• 2.1.1. Sinh phẩm
• 2.1.2. Hóa chất
• 2.1.3. Trang thiết bị
• 2.2. Phương pháp nghiên cứu
• 2.2.1. Sàng lọc Aptamer đặc hiệu HER2 (Phương pháp SELEX)
• 2.2.1.1. Chuẩn bị thư viện
• 2.2.1.2. Sàng lọc
• 2.2.1.3. Phương pháp tách dòng và giải trình tự
• 2.2.1.3.1. Nhân bản Aptamer đặc hiệu với HER2 bằng phương pháp PCR
• 2.2.1.3.2. Phân tích điện di trên gel agarose
• 2.2.1.3.3. Phương pháp tinh sạch sản phẩm phản ứng PCR
• 2.2.1.3.4. Phản ứng gắn gen vào vector tách dòng
• 2.2.1.3.5. Biến nạp plasmid vào E.coli chủng DH5a
• 2.2.1.3.6. Phương pháp tách ADN plasmid từ vi khuẩn E. coli
• 2.2.1.3.7. Phương pháp xác định trình tự nucleotide
• 2.2.1.4. Phương pháp gắn Aptamer lên hạt nano vàng
• 2.2.2. Phương pháp gắn Aptamer lên bề mặt điện cực
• 2.2.2.1. Xử lý và làm sạch điện cực Au
• 2.2.2.2. Tạo lớp MPA trên bề mặt điện cực vàng
• 2.2.2.3. Gắn NHS lên bề mặt điện cực đã xử lý với MPA
• 2.2.2.4. Gắn NH2-Aptamer lên điện cực Au/MPA-NHS
• 2.2.2.5. Định lượng HER2 trong mẫu bằng điện cực Au/MPA-NHS
• 2.2.2.6. Tái sử dụng điện cực Au/MPA-NHS
• 2.2.2.7. Đánh giá hoạt động của Aptasensor
• 2.2.3. Phương pháp lai Dot blot
• Chương III: Kết quả và thảo luận
• 3.1. Sàng lọc Aptamer đặc hiệu HER2
• 3.1.1. Kết quả thu nhận và xác định trình tự Aptamer
• 3.1.2. Kết quả xác định cấu trúc không gian của Aptamer
• 3.1.3. Xác định kết quả tạo phức hệ Aptamer-hạt nano vàng
• 3.1.4. Xác định gắn kết của Aptamer trên tế bào BT474 và tế bào MCF7
• 3.1.5. Xác định sự gắn kết của Aptamer với HER2 bằng kỹ thuật Dot blot
• 3.2. Chế tạo Biosensor điện hóa
• 3.2.1. Làm sạch và hoạt hóa điện cực
• 3.2.2. Tạo đơn lớp mỏng trên bề mặt điện cực vàng
• 3.2.3. Gắn Aptamer lên điện cực đã tạo lớp màng mỏng trên bề mặt
• 3.2.4. Phong tỏa các vị trí gắn kết không đặc hiệu trên bề mặt điện cực
• 3.2.5. Định lượng kháng nguyên HER2 trong các mẫu phân tích
• Chương IV: Kết luận và kiến nghị
• Tài liệu tham khảo