Báo cáo Y học: Molecular cloning, bacterial expression and properties of Rab31 and Rab32

Molecular cloning, bacterial expression and properties of Rab31 and Rab32

Tên đề tài: Molecular cloning, bacterial expression and properties of Rab31 and Rab32

Tác giả: Xiankun Bao, Andrea E. Faris, Elliott K. Jang, and Richard J. Haslam

Lĩnh vực: Pathology and Molecular Medicine and Biochemistry

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân lập, biểu hiện trong vi khuẩn và đặc tính của hai protein Rab mới là Rab31 và Rab32 từ tiểu cầu người. Phương pháp RT-PCR được sử dụng để xác định các trình tự mã hóa cho Rab31 và Rab32, cũng như Rab11A, một protein chưa từng được phát hiện trước đó trong tiểu cầu. Các đặc tính sinh hóa của các protein tái tổ hợp, bao gồm khả năng liên kết với GTP và hoạt tính GTPase, đã được điều tra. Nghiên cứu cũng xem xét sự biểu hiện của các protein này trong các mô và tế bào khác nhau của con người.

Mục lục chi tiết:

• Molecular cloning, bacterial expression and properties of Rab31 and Rab32
• New blood platelet Rab proteins
• Experimental procedures
• Materials
• Human cell lines
• Isolation of human platelets and their subcellular fractionation
• Isolation of mRNA and total RNA
• Cloning of platelet Rab cDNA sequences
• Northern blotting analysis
• Immunoblotting
• Bacterial expression of Rab31 and Rab32
• Mutagenesis of Rab31 and Rab32
• Binding of [α-32P]GTP by GST-Rab proteins on nitrocellulose blots
• Binding of [35S]GTP[S] by GST-Rab proteins
• GTPase assays
• Results
• Cloning of platelet Rab proteins
• Expression of Rab31 and Rab32
• Discussion
• Relationships of Rab31 and of Rab32 to other Rab proteins
• Expression of Rab31, Rab32 and Rab11A in platelets
• Binding of guanine nucleotides and hydrolysis of GTP by GST-Rab31 and GST-Rab32
• Acknowledgements
• References