Báo cáo Y học: LRP130, a protein containing nine pentatricopeptide repeat motifs, interacts with a single-stranded cytosine-rich sequence of mouse hypervariable minisatellite Pc-1

LRP130, a protein containing nine pentatricopeptide repeat motifs, interacts with a single-stranded cytosine-rich sequence of mouse hypervariable minisatellite Pc-1

Tác giả: Naoto Tsuchiya, Hirokazu Fukuda, Takashi Sugimura, Minako Nagao and Hitoshi Nakagama

Lĩnh vực: Biochemistry Division, National Cancer Center Research Institute, Chuo-ku, Tokyo, Japan

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này mô tả việc xác định và đặc tính hóa một protein giàu leucine ở chuột (mLRP130) là một trong những protein liên kết với chuỗi giàu cytosine (C-rich) của minisatellite Pc-1 ở chuột. mLRP130 chứa chín motif pentatricopeptide repeat (PPR), được cho là có vai trò trong tương tác protein-protein. Hai dạng của mLRP130, với khối lượng phân tử xấp xỉ 140 kDa (mLRP130) và 100 kDa (mLRP130der), đã được phát hiện trong tế bào NIH3T3. Phân tích miễn dịch huỳnh quang cho thấy mLRP130 chủ yếu tập trung ở vùng quanh nhân, nhân và tế bào chất với các kiểu nhuộm dạng chấm hoặc lượn sóng. Protein mLRP130 đã kết tủa miễn dịch liên kết với chuỗi đơn giàu cytosine d(CTGCC)8, nhưng không liên kết với chuỗi giàu guanine bổ sung d(GGCAG)8 hoặc dạng hai chuỗi. Các vai trò sinh học tiềm năng của mLRP130 được thảo luận liên quan đến sự ổn định của các chuỗi DNA minisatellite.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and Methods
• Cloning of a cDNA encoding mLRP130
• Northern blot analysis
• Preparation of polyclonal antibodies
• Immunoblot analysis
• Cell fractionation
• Indirect immunofluorescence microscopy
• Immunoprecipitation
• Electrophoretic mobility shift assay (EMSA)
• Results
• Isolation of mLRP130 cDNA
• Expression of mLRP130 mRNA
• Subcellular localization of mLRP130 in NIH3T3 cells
• mLRP130 binds to the single-stranded C-rich sequence of MN Pc-1
• Sequence specificity for DNA binding
• Discussion
• Acknowledgements
• References