Báo cáo Y học: Ligand-induced heterodimerization between the ligand binding domains of the Drosophila ecdysteroid receptor and ultraspiracle

Ligand-induced Heterodimerization Between the Ligand Binding Domains of the Drosophila Ecdysteroid Receptor and Ultraspiracle

Tác giả: Markus Lezzi, Thomas Bergman, Vincent C. Henrich, Martin Vögtli, Christina Frömel, Marco Grebe, Sabina Przibilla, Margarethe Spindler-Barth

Lĩnh vực: Sinh học Tế bào, Sinh học Phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá khả năng hình thành thể dị hợp tử (heterodimerization) giữa các miền gắn kết ligand (LBD) của thụ thể ecdysteroid (EcR) và ultraspiracle (USP) từ ruồi giấm Drosophila melanogaster. Kết quả cho thấy các đoạn protein này, ngay cả khi thiếu miền gắn kết DNA, có thể tự tương tác một cách yếu ớt. Tuy nhiên, sự hình thành thể dị hợp tử này được tăng cường đáng kể khi có sự hiện diện của ecdysteroid. Nghiên cứu sử dụng hệ thống yeast hai-lai (two-hybrid) và thử nghiệm dịch chuyển điện di tốc độ thay đổi (EMSA) để chứng minh rằng ecdysteroid có thể thúc đẩy sự hình thành thể dị hợp tử giữa EcR và USP, ngay cả khi sự gắn kết của các protein thụ thể này với các yếu tố đáp ứng DNA không xảy ra. Điều này cho thấy cơ chế điều hòa hoạt động của ecdysteroid trong quá trình phát triển của côn trùng.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and Methods
• Plasmids
• Constructs encoding fragment I
• Constructs encoding fragment II
• Constructs encoding fragment III
• Constructs encoding fragments IV and V
• Constructs encoding fragments VI and VII
• Plasmids coding for fusion proteins with the C-terminal fragment of USP
• PCR reaction, sequence verification
• Yeast strains
• Preparation of yeast extracts for two-hybrid studies
• Ligands
• Preparation of yeast extracts for biochemical analyses
• Supershift-type electrophoretic mobility shift assays (ST-EMSAs)
• Ligand-binding assays
• Results
• Spontaneous heterodimerization in vivo
• Ligand-induced heterodimerization in vivo
• Ligand-induced heterodimerization in vitro
• Ligand binding to EcR or USP fragments containing fusion proteins
• Discussion
• Acknowledgements
• References