Báo cáo khoa học: Investigating the role of the invariant carboxylate residues E552 and E1197 in the catalytic activity of Abcb1a (mouse Mdr3)

Investigating the role of the invariant carboxylate residues E552 and E1197 in the catalytic activity of Abcb1a (mouse Mdr3)

Tác giả: Isabelle Carrier and Philippe Gros

Lĩnh vực: Biochemistry and McGill Cancer Centre, McGill University, Montreal, Canada

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào vai trò của các gốc carboxylate bất biến (invariant carboxylate residues – IC) E552 và E1197 trong miền liên kết nucleotide (NBD) của Abcb1a (chuột Mdr3) đối với hoạt động xúc tác. Các nhà nghiên cứu đã tạo ra các dạng đột biến đơn lẻ và kép của Abcb1a để kiểm tra hoạt động ATP hydrolysis, ái lực liên kết và các đặc tính bắt giữ. Kết quả cho thấy độ dài của chuỗi bên gốc carboxylate bất biến quan trọng đối với hoạt động xúc tác, trong khi điện tích của nó lại cần thiết cho quá trình chuyển hóa đầy đủ. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng các NBD không đối xứng và các gốc carboxylate bất biến tham gia vào cả sự giao tiếp giữa các NBD lẫn sự hình thành trạng thái chuyển tiếp.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results
• Discussion
• Experimental procedures
• Abcb1a cDNA modifications
• Purification of Abcb1a
• Assay of ATPase activity
• Photoaffinity labeling with 8-azido-[³²P]ATP
• TLC analysis of vanadate-trapped nucleotides in Abcb1a
• Partial trypsin digestion of photolabeled Abcb1a
• Routine procedures
• Materials
• Acknowledgements
• References