Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 448 KB

Giới thiệu nội dung

Insights Into The Structure Of Plant α-Type Phospholipase D

Tác giả: Susanne Stumpe, Stephan König, and Renate Ulbrich-Hofmann

Lĩnh vực: Biochemistry and Biotechnology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc tìm hiểu cấu trúc của enzyme phospholipase D loại alpha (PLDa) từ bắp cải. Bằng các phương pháp như tán xạ tia X góc nhỏ (SAXS), phổ hấp thụ UV, phổ CD và phổ huỳnh quang, các nhà khoa học đã thu được những hiểu biết ban đầu về cấu trúc bậc hai và bậc ba của PLDa2. Mô hình cấu trúc thu được từ dữ liệu SAXS cho thấy PLDa2 là một protein dạng hình trụ với các vùng đỉnh lỏng lẻo. Phân tích phổ CD cho thấy sự hiện diện của các yếu tố cấu trúc alpha-helix và beta-sheet, trong đó beta-sheet chiếm ưu thế. Các phổ huỳnh quang và CD vùng UV gần chỉ ra sự đóng gói chặt chẽ của các gốc thơm trong lõi protein. Nghiên cứu cũng xác định được hai sự kiện liên kết với ion canxi với các hằng số phân ly khác nhau. Độ ổn định của PLDa2 bị giảm đáng kể khi có mặt ion canxi, dẫn đến sự ngưng tụ và bất hoạt không thể đảo ngược, chủ yếu do các hiệu ứng gây ra bởi muối.

Mục lục chi tiết:

  • Keywords
  • Correspondence
  • Abstract
  • Introduction
  • Results
  • PLD2 preparation
  • Structural information from SAXS
  • Structural information from spectroscopy
  • Storage stability and aggregation propensity
  • Calcium binding
  • Discussion
  • PLD2 is a barrel-shaped monomer with loosely structured tops
  • Spectroscopic properties of PLD2 reflect an ordered tertiary structure with a high content of β-structure
  • PLDa2 is stable at low ionic strengths
  • PLDa2 binds calcium ions at two affinity levels
  • Experimental procedures
  • Materials
  • Production of PLD2
  • Purification of PLD2
  • Determination of protein concentration
  • SDS/PAGE
  • Small angle X-ray solution scattering with synchrotron radiation
  • Size exclusion chromatography
  • Absorption and CD spectroscopy
  • Fluorescence spectroscopy
  • Enzyme assays
  • Acknowledgements
  • References