Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 16 trang
Dung lượng: 263 KB

Giới thiệu nội dung

Inhibitory Properties and Solution Structure of a Potent Bowman-Birk Protease Inhibitor from Lentil (Lens culinaris, L) Seeds

Tác giả: Enzio M. Ragg, Valerio Galbusera, Alessio Scarafoni, Armando Negri, Gabriella Tedeschi, Alessandro Consonni, Fabio Sessa, and Marcello Duranti

Lĩnh vực: Khoa học Phân tử Nông nghiệp Thực phẩm, Y tế và Sức khỏe Động vật/Hóa sinh

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này trình bày chi tiết về quá trình phân lập, đặc tính chức năng và cấu trúc của một chất ức chế protease thuộc họ Bowman-Birk (BBI) được chiết xuất từ hạt đậu lăng (Lens culinaris, L., var. Macrosperma). Chất ức chế này, được đặt tên là LCTI (Lens culinaris trypsin inhibitor), có khối lượng 7448 Da, sở hữu hai vị trí ức chế cho cả trypsin và chymotrypsin. Các nghiên cứu động học đã chỉ ra rằng LCTI bị thủy phân bởi trypsin trong khoảng thời gian ngắn, dẫn đến sự suy giảm đáng kể ái lực với enzyme. Điều này trái ngược với phản ứng với chymotrypsin. Cấu trúc ba chiều của LCTI đã được xác định bằng phương pháp cộng hưởng từ hạt nhân (NMR), cho thấy một cấu trúc BBI cổ điển với hai vùng β-hairpin đối cực. Các tương tác ion và liên kết hydro đóng vai trò quan trọng trong việc ổn định cấu trúc bậc ba. Cấu trúc cuối cùng thể hiện sự phân bố bất đối xứng của các điện tích, với tiềm năng điện tích âm ở đầu C và tiềm năng điện tích dương mạnh mẽ xung quanh vùng ức chế trypsin. Các đặc tính ức chế khác thường của LCTI, liên quan đến sự hiện diện đồng thời của hai axit amin then chốt (Gln18 và His54), làm cho phân tử này trở nên độc đáo trong họ Bowman-Birk tự nhiên.

Mục lục chi tiết:

  • Keywords
  • Correspondence
  • Abstract
  • Introduction
  • Results
  • Purification, mass spectrometry analysis and primary structure determination of LCTI
  • Antitrypsin and antichymotrypsin activity assays
  • 1H-NMR sequential assignments and secondary structure determination
  • Deuterium exchange experiments and temperature coefficient measurements
  • Solution structure of LCTI
  • Discussion
  • Experimental procedures
  • Extraction and purification of BBI from Lens culinaris seeds
  • Mass spectrometry and amino acid sequencing
  • Antitryptic and antichymotryptic inhibition assays
  • Numerical analysis of the inhibitory activity
  • 1H-NMR spectroscopy
  • Solution structure calculation
  • Acknowledgements
  • References
  • Supplementary material