Báo cáo khoa học: Identification and characterization of two dipeptidylpeptidase III isoforms in Drosophila melanogaster

Identification and characterization of two dipeptidyl-peptidase III isoforms in Drosophila melanogaster

Tác giả: Claire Mazzocco, Jennifer Gillibert-Duplantier, Veronique Neaud, Kayoko M. Fukasawa, Stéphane Claverol, Marc Bonneu and Jacques Puiroux

Lĩnh vực: Sinh hóa, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định và mô tả hai dạng đồng phân (isoform) của enzyme dipeptidyl-peptidase III (DPP III) trong ruồi giấm Drosophila melanogaster. Các nhà nghiên cứu đã thành công trong việc tinh sạch và đặc tính hóa hai protein DPP III có khối lượng phân tử 89 và 82 kDa. Phân tích MS/MS đã xác nhận trình tự của các đoạn peptide, chứng minh sự tồn tại của hai dạng đồng phân DPP III được dự đoán trong bộ gen D. melanogaster. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng cả hai dạng đồng phân này đều chứa miền xúc tác HELLGH, cho phép chúng có khả năng phân hủy hiệu quả các peptide nhỏ. Phân tích Northern blot cho thấy sự hiện diện của hai bản mã mRNA tương ứng với hai dạng đồng phân này. Quan trọng hơn, enzyme đã được chứng minh là có khả năng thủy phân neuropeptide proctolin và bị ức chế bởi tynorphin. Sự phát hiện miễn dịch DPP III trong hệ thần kinh trung ương của ấu trùng D. melanogaster gợi ý vai trò chức năng của enzyme trong việc phân hủy proctolin.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results
• Purification of soluble fruit fly DPP III
• MS/MS analysis of purified enzyme
• Activity assay, kinetic studies and inhibition stimulation of the purified enzyme
• Central nervous system immunoreactivity
• Discussion
• Experimental procedures
• Materials
• Dissections and immunocytochemistry
• Purification of enzyme
• Activity assay, kinetic studies and inhibition stimulation of purified enzyme
• SDS/PAGE and western blot analysis of purified enzyme
• MS/MS analysis of the purified enzyme
• Northern blot analysis
• References