Báo cáo Y học: Identification and characterization of the Escherichia coli stress protein UP12, a putative in vivo substrate of GroEL

Tác giả: Elena S. Bochkareva, Alexander S. Girshovich, and Eitan Bibi

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Vi sinh vật học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định và mô tả protein UP12, một protein ứng viên được cho là chất nền trong vivo của GroEL trong vi khuẩn Escherichia coli. GroEL là một chaperone phân tử được bảo tồn cao, đóng vai trò quan trọng trong phản ứng của tế bào với các điều kiện căng thẳng. Các nhà nghiên cứu đã xác định UP12 cùng với GatY là hai polypeptide được giải phóng khỏi phức hợp GroEL khi có mặt GroES và/hoặc ATP từ các quần thể nuôi cấy trong pha tĩnh. Nghiên cứu này đi sâu vào việc phân tích UP12, cho thấy nó tích lũy trong các điều kiện ức chế tăng trưởng và cảm ứng bởi sốc nhiệt. Một chủng đột biến thiếu UP12 phục hồi chậm hơn từ các điều kiện tăng trưởng pha tĩnh muộn và nhạy cảm hơn với các tác nhân độc hại. Các thí nghiệm đồng miễn dịch cho thấy UP12 tương tác với GroEL, cho thấy UP12 có thể hoạt động như một protein ứng suất phổ quát, và sự tương tác của nó với GroEL có thể đảm bảo trạng thái gấp nếp phù hợp của protein.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Quy trình thực nghiệm
• Cấu trúc và điều kiện nuôi cấy vi khuẩn
• Phân lập GroEL và phức hợp GroEL từ chiết xuất tế bào
• Phân lập protein X (GatY) và Y (UP12)
• Gắn gen và xóa bỏ gen mã hóa ybdQ trên nhiễm sắc thể (mã hóa UP12)
• Cận dưới và blotting Western
• Kết quả
• Phân lập phức hợp GroEL-polypeptide từ quần thể nuôi cấy pha tĩnh
• Sự biểu hiện UP12 được cảm ứng trong điều kiện ức chế tăng trưởng ở pha tĩnh và do đói
• Sự biểu hiện UP12 được cảm ứng đáp ứng với các tác nhân độc hại và tăng nhiệt độ
• Chủng đột biến E. coli ΔybdQ thể hiện tốc độ tăng trưởng giảm trong giai đoạn thoát khỏi pha tĩnh và tăng độ nhạy cảm với CCCP
• Thảo luận
• Lời cảm ơn
• Tài liệu tham khảo