Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 193 KB

Giới thiệu nội dung

Homologous Expression of a Bacterial Phytochrome

Tên đề tài: Homologous expression of a bacterial phytochrome

Tác giả: Benjamin Quest, Thomas Hübschmann, Shivani Sharda, Nicole Tandeau de Marsac, Wolfgang Gärtner

Lĩnh vực: Sinh hóa học, Sinh học phân tử, Sinh học vi sinh vật

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc biểu hiện và phân lập bacteriophytochrome (BphP) CphB từ vi khuẩn lam Fremyella diplosiphon trong môi trường tự nhiên của nó. Mục tiêu là xác định loại sắc tố (chromophore) được tích hợp trong vivo vào CphB, một protein mà không có cysteine liên kết cộng hóa trị điển hình như các phytochromes thực vật và vi khuẩn khác. Nghiên cứu đã chứng minh rằng biliverdin IXα (BV IXα) là sắc tố thực sự và chức năng của CphB, và hoạt tính kinase của CphB phụ thuộc chặt chẽ vào trạng thái ánh sáng Pr. Kết quả này cung cấp cái nhìn sâu sắc về sự đa dạng của các sắc tố được sử dụng bởi bacteriophytochromes và cơ chế điều hòa tín hiệu ánh sáng ở sinh vật nhân sơ.

Mục lục chi tiết:

  • Homologous expression of cphB
  • Results
  • Identification of CphBcy by HPLC and MS
  • Light-induced autophosphorylation and transphosphorylation of CphBcy
  • Heterologously expressed mutated CphB
  • Discussion
  • Experimental procedures
  • Cyanobacterial strains and culture media
  • Cloning
  • Generation of site-directed mutations
  • Conjugal transfer of DNA to cyanobacteria
  • Homologous expression
  • Heterologous expression
  • Protein purification
  • Visualization of chromoproteins via Zn-fluorescence
  • Assembly of recombinant chromoproteins, determination of absorption and difference absorption spectra, and measurement of Pfr stability
  • Phosphorylation of CphBcy and transphosphorylation to RcpB
  • MALDI-TOF MS
  • LC-MS
  • Acknowledgements
  • References