High affinity copper binding by stefin B (cystatin B) and its role in the inhibition of amyloid fibrillation

High Affinity Copper Binding by Stefin B (Cystatin B) and Its Role in the Inhibition of Amyloid Fibrillation

Tác giả: Eva Žerovnik, Katja Škerget, Magda Tušek-Žnidarič, Corina Loeschner, Marcus W. Brazier, David R. Brown

Lĩnh vực: Biochemistry and Molecular Biology, Plant Physiology and Biotechnology, Biology and Biochemistry

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá khả năng liên kết đồng của stefin B (cystatin B), một protein ức chế protease, và vai trò của nó trong việc ngăn chặn sự hình thành sợi amyloid. Kết quả chỉ ra rằng stefin B có ái lực cao với đồng, với hai vị trí liên kết ái lực cao ở pH 7 và ái lực thấp hơn ở pH 5. Sự liên kết đồng này đã được chứng minh là ức chế sự hình thành sợi amyloid và sự kết tụ ban đầu của protein. Nghiên cứu cũng thảo luận về những điểm tương đồng và khác biệt so với các protein tạo amyloid khác có khả năng liên kết đồng.

Mục lục chi tiết:

• Keywords (copper-binding proteins; cystatin; inhibition of amyloid fibril formation; oligomers; protein aggregation; stefin B)
• Correspondence
• (Received 3 May 2006, revised 16 July 2006, accepted 18 July 2006)
• doi:10.1111/j.1742-4658.2006.05426.x
• Abstract
• Introduction
• Results
• Measurement of copper binding by isothermal titration calorimetry
• Conformation and stability in the presence and absence of copper
• Influence of copper on oligomerization, aggregation and amyloid fibril formation
• Discussion
• Cystatins and neurodegenerative disease
• Stefin B as a copper binding protein
• Experimental procedures
• Materials
• Recombinant proteins
• Isothermal titration calorimetry measurements
• CD spectroscopy
• CD spectra analysis
• Fibrillation assays
• ThT fluorescence measurements
• Transmission electron microscopy
• Size-exclusion chromatography
• Acknowledgements
• References