Báo cáo khoa học: Heterologous expression of a serine carboxypeptidase-like acyltransferase and characterization of the kinetic mechanism

Heterologous Expression of a Serine Carboxypeptidase-like Acyltransferase and Characterization of the Kinetic Mechanism

Tác giả: Felix Stehle, Milton T. Stubbs, Dieter Strack, Carsten Milkowski

Lĩnh vực: Hóa sinh thực vật, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc biểu hiện dị thể của enzyme acyltransferase giống serine carboxypeptidase (SMT) từ Arabidopsis (AtSMT) và đặc tính hóa cơ chế động học của nó. Các nhà nghiên cứu đã phát triển một hệ thống biểu hiện hiệu quả trong Saccharomyces cerevisiae, tối ưu hóa việc sử dụng codon, peptide tín hiệu và liều lượng gen để tăng đáng kể sản lượng protein. Phân tích động học chi tiết cho thấy AtSMT hoạt động theo cơ chế ngẫu nhiên tuần tự bi-bi, khác với cơ chế dịch chuyển kép đặc trưng của các enzyme serine carboxypeptidase. Nghiên cứu cũng làm sáng tỏ các yêu cầu về cấu trúc của chất nhận acyl, đặc biệt là L-malate, và cung cấp bằng chứng về khả năng xúc tác phản ứng chuyển acyl của enzyme này.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Từ khóa
• Thư từ liên lạc
• Tóm tắt
• Biểu hiện dị thể của acyltransferase giống serine carboxypeptidase và đặc tính hóa cơ chế động học của AtSMT
• Kết quả
• Biểu hiện của AtSMT trong các vật chủ eukaryotic khác nhau
• Tối ưu hóa biểu hiện của AtSMT trong S. cerevisiae
• Tối ưu hóa trình tự
• Tín hiệu peptide
• Liều lượng gen
• Xác định cơ chế động học
• Nghiên cứu động học
• Đặc tính của enzyme đối với L-malate
• Thủ tục thực nghiệm
• Vật liệu thực vật và tế bào nấm men
• Oligonucleotides
• Biểu hiện của AtSMT trong N. tabacum
• Biểu hiện của AtSMT trong S. frugiperda Sf9 cells
• Biểu hiện của AtSMT trong S. cerevisiae
• Cấu trúc cho biểu hiện SMT trong S. cerevisiae
• Xây dựng plasmid đa bản sao pDIONYSOS
• Lên men nấm men
• Tinh chế SMT
• Kiểm tra hoạt tính SMT
• Lời cảm ơn
• Tài liệu tham khảo
• Tài liệu bổ sung