Báo cáo khoa học: Gain of structure and IgE epitopes by eukaryotic expression of the major Timothy grass pollen allergen, Phl p 1

Gain of Structure and IgE Epitopes by Eukaryotic Expression of the Major Timothy Grass Pollen Allergen, Phl p 1

Tác giả: Tanja Ball, William Edstrom, Ludwig Mauch, Jacky Schmitt, Bernd Leistler, Helmut Fiebig, Wolfgang R. Sperr, Alexander W. Hauswirth, Peter Valent, Dietrich Kraft, Steven C. Almo, and Rudolf Valenta

Lĩnh vực: Dị ứng học, miễn dịch học, công nghệ sinh học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào biểu hiện của protein dị ứng Phl p 1 từ cỏ Timothy bằng công nghệ biểu hiện sinh học nhân chuẩn trong tế bào côn trùng. Mục tiêu là làm sáng tỏ cấu trúc và các epitope nhận diện bởi kháng thể IgE của Phl p 1, một trong những tác nhân gây dị ứng hô hấp phổ biến. Kết quả cho thấy vùng C-terminal chiếm 40% protein là một domain ổn định, có độ tương đồng với các protein dị ứng khác. Phân tích cấu trúc bằng phổ kế khối và phổ vòng lưỡng sắc chỉ ra rằng protein biểu hiện trong tế bào côn trùng có cấu trúc thứ cấp phức tạp và có khả năng kết tinh, cho phép phân tích cấu trúc chi tiết hơn. So sánh với protein biểu hiện trong vi khuẩn E. coli, protein biểu hiện bằng phương pháp sinh học nhân chuẩn cho thấy khả năng nhận diện IgE vượt trội và hoạt tính dị ứng mạnh mẽ hơn, nhấn mạnh tầm quan trọng của cấu trúc không gian ba chiều và các epitope cấu hình đối với phản ứng dị ứng.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Abbreviations
• Approximately 400 million allergic patients are sensitized against group 1 grass pollen allergens…
• Type I allergy is an IgE-mediated hypersensitivity disease…
• Results
• Comparison of natural and recombinant group 1 grass pollen allergens
• Biochemical and biophysical characterization of insect-cell expressed Phl p 1
• Insect cell-expressed Phl p 1 represents a folded protein with considerable β-sheet structure that crystallizes as thin plates
• Phl p 1 and Phl p 2 belong to different clusters of proteins as determined by phylogenetic analysis
• Insect cell-expressed Phl p 1 contains the IgE epitopes of natural Phl p1
• Discussion
• Experimental procedures
• Materials, patients’ sera and antibodies
• Construction of recombinant baculovirus
• Expression and purification of rPhl p 1 from baculovirus-infected insect cells
• Mass spectrometry
• Limited proteolysis followed by LC-MS
• Detection of glycoproteins and deglycosylation treatment
• Circular dichroism (CD) measurements
• Phylogenetic analysis of the relationships among group 1 and group 2/3 allergens from various grass species
• SDS/PAGE analysis and immunoblotting
• IgE-binding capacity and cross-reactivity of allergens as determined by nondenaturing dot-blot experiments
• Basophil activation experiments
• Acknowledgements
• References