Báo cáo Y học: Functional reconstitution of the HIV receptors CCR5 and CD4 in liposomes

Functional Reconstitution of the HIV Receptors CCR5 and CD4 in Liposomes

Tên đề tài: Functional Reconstitution of the HIV Receptors CCR5 and CD4 in Liposomes

Tác giả: François Devesa, Vida Chams, Premkumar Dinadayala, Alexandre Stella, Aude Ragas, Henri Auboiroux, Toon Stegmann and Yannick Poquet

Lĩnh vực: Institut de Pharmacologie et de Biologie Structurale; CNRS UMR 5089, Toulouse, France

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày một phương pháp tái tổ hợp bằng kỹ thuật hậu lắp ghép cho phép kết hợp đồng thời CCR5 và CD4 vào cùng một màng liposome. Phương pháp này đã được áp dụng thành công để tái tổ hợp cả hai protein, vốn có cấu trúc và chức năng khác biệt, vào màng liposome. Các proteoliposome đã được tái tổ hợp cho thấy khả năng nhận biết các phối tử tự nhiên của CCR5, kháng thể đặc hiệu CCR5, và CD4 liên kết với gp120 của virus HIV. Nghiên cứu chỉ ra rằng phương pháp này có khả năng ứng dụng rộng rãi cho việc tái tổ hợp các protein màng khác, đặc biệt là những protein có số lượng nhỏ.

Mục lục chi tiết:

• Functional reconstitution of the HIV receptors CCR5 and CD4 in liposomes
• Reconstitution of membrane proteins allows their study in a membrane environment that can be manipulated at will.
• Keywords: membrane protein; reconstitution; liposome.
• MATERIALS AND METHODS
• Materials
• Construction and stable expression of HIV receptor vectors
• Western blot analysis and 35S-labelled CCR5-myc-his detection
• CCR5-myc-his labelling and purification
• Liposome preparation and CCR5-myc-his reconstitution
• MIP-1a binding experiments
• Anti-CCR5 binding experiments
• Protein orientation
• Co-immunoprecipitation of proteoliposomes
• Cell-cell fusion experiments
• Binding of a soluble version of the JR-FL gp120/gp41 to proteoliposomes
• Binding of proteoliposomes to gp120/gp41 expressing cells
• RESULTS
• Functional expression of a Myc-his tagged version of CCR5, and a his-tagged version of CD4
• Purification of CCR5-myc-his
• Reconstitution of CCR5-myc-his
• Fig. 2. The tagged version of CCR5 binds MIP-1a, is down-regulated and can serve as a coreceptor for fusion.
• Fig. 3. CCR5-myc-his purification.
• Fig. 4. Reconstitution of CCR5-myc-his.
• Fig. 5. Analysis of CCR5-myc-his reconstituted into liposomes.
• Fig. 6. Specific binding of anti-CCR5 antibody to proteoliposomes.
• Fig. 7. Non-classical behaviour of MIP-1a observed with CCR5 proteoliposomes.
• Fig. 8. MIP-1a binds specifically to CCR5 proteoliposomes.
• Fig. 9. Co-reconstitution of CD4 and CCR5.
• Fig. 10. Binding of soluble gp 120 or cells expressing gp120/gp41 to proteoliposomes containing CD4 and CCR5.
• DISCUSSION
• REFERENCES