Enzymatic investigation of the Staphylococcus aureus type I signal peptidase SpsB – implications for the search for novel antibiotics

Enzymatic investigation of the Staphylococcus aureus type I signal peptidase SpsB – implications for the search for novel antibiotics

Tên đề tài: Enzymatic investigation of the Staphylococcus aureus type I signal peptidase SpsB – implications for the search for novel antibiotics

Tác giả: Smitha Rao C.V., Katrijn Bockstael, Sangeeta Nath, Yves Engelborghs, Jozef Anné, and Nick Geukens

Lĩnh vực: Bacteriology, Medicinal Chemistry, Biomolecular Dynamics

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này tập trung vào việc điều tra đặc tính sinh hóa của enzyme peptidasetype I SpsB của vi khuẩn Staphylococcus aureus. SpsB được xem là một đích tiềm năng trong việc tìm kiếm các loại kháng sinh mới với cơ chế tác động khác biệt. Bài báo mô tả chi tiết các đặc tính của SpsB, bao gồm cả việc so sánh với các peptidasetype I đã được biết đến trước đây. Hai loại cơ chất khác nhau đã được sử dụng để đánh giá hoạt động xử lý của SpsB trong điều kiện in vitro: (a) kháng nguyên A tiền thân mang dấu hiệu miễn dịch tự nhiên và (b) một peptide huỳnh quang tổng hợp được thiết kế đặc biệt để phân tích bằng phương pháp cộng hưởng năng lượng huỳnh quang chuyển giao (FRET). Nghiên cứu đã làm rõ các đặc điểm hoạt động của enzyme theo các mức độ pH khác nhau, tiết lộ giá trị pH tối ưu xấp xỉ 8. Các phát hiện cũng nhấn mạnh vai trò quan trọng của các axit amin trong đoạn xuyên màng và các axit amin đứng trước serine xúc tác trong chuỗi SpsB. Ngoài ra, nghiên cứu còn chỉ ra rằng hoạt tính của SpsB bị biến đổi khi có sự hiện diện của chất hoạt động bề mặt không ion.

Mục lục chi tiết:

• Expression and purification of the full-length SpsB and preprotein IsaA
• In vitro preprotein processing by SpsB
• A continuous fluorometric assay for SpsB and measurement of its specific enzymatic activity
• Activity at varying pH and the pH-rate profile of SpsB
• Stability and the effect of temperature on the in vitro activity of SpsB
• In vitro self-cleavage
• Expression, purification, in vitro activity and the requirement of detergent of an N-terminally truncated SpsB (tr-SpsB) derivative
• Experimental procedures