Engineering Of Monomeric Fk506-Binding Protein 22 With Peptidyl Prolyl Cis-Trans Isomerase Importance Of A V-Shaped Dimeric Structure For Binding To Protein Substrate

Engineering of monomeric FKBP22 with peptidyl prolyl cis-trans isomerase Importance of a V-shaped dimeric structure for binding to protein substrate

Tác giả: Cahyo Budiman, Keisuke Bando, Clement Angkawidjaja, Yuichi Koga, Kazufumi Takano, Shigenori Kanaya

Lĩnh vực: Khoa học Vật liệu và Khoa học Đời sống, Trường Sau đại học Kỹ thuật, Đại học Osaka

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này khám phá vai trò của cấu trúc dimer hình chữ V trong protein FKBP22 (FK506-binding protein 22) từ vi khuẩn tâm thích Shewanella sp. SIB1 đối với việc gắn kết với chất nền protein. Protein FKBP22 là một homodimer với hoạt tính peptidyl prolyl cis-trans isomerase (PPIase). Nghiên cứu đã chế tạo một protein biến thể đơn phân tử, NNC-FKBP22, có cấu trúc tương tự protein hoang dã (WT) nhưng tồn tại dưới dạng đơn phân tử. Kết quả cho thấy NNC-FKBP22 có hoạt tính PPIase đối với chất nền peptide tương đương WT, nhưng hoạt tính đối với chất nền protein giảm từ 5-6 lần. Khả năng gắn kết với a-lactalbumin đã giảm ái lực 6.5 lần so với WT. Các dữ liệu này chỉ ra rằng cấu trúc dimer hình chữ V của SIB1 FKBP22 đóng vai trò quan trọng trong việc gắn kết hiệu quả với chất nền protein, và có thể ảnh hưởng đến hoạt tính PPIase đối với chất nền protein.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Thiết kế protein biến thể đơn phân tử
• Xác định trạng thái oligomer
• Phổ CD
• Nhiệt động lực học khi biến tính
• Hoạt tính PPIase
• Gắn kết với a-lactalbumin đã khử
• Vai trò của cấu trúc hình chữ V
• Hoạt tính PPIase của NNC-FKBP22
• Độ ổn định của NNC-FKBP22
• Thủ tục thực nghiệm
• Xây dựng plasmid
• Sự biểu hiện quá mức và tinh sạch
• Khối lượng phân tử
• Hoạt tính enzyme