Báo cáo khoa học: Effect of sequence polymorphism and drug resistance on two HIV-1 Gag processing sites

Effect Of Sequence Polymorphism And Drug Resistance On Two HIV-1 Gag Processing Sites

Tác giả: Anita Fehér, Irene T. Weber, Péter Bagossi, Péter Boross, Bhuvaneshwari Mahalingam, John M. Louis, Terry D. Copeland, Ivan Y. Torshin, Robert W. Harrison and József Tözsér

Lĩnh vực: Biochemistry and Molecular Biology, Virology, Drug Resistance

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá ảnh hưởng của sự đa dạng trình tự và đột biến kháng thuốc lên hai vị trí cắt Gag của virus HIV-1. Virus HIV-1 PR là mục tiêu quan trọng trong điều trị AIDS, tuy nhiên sự xuất hiện của các biến thể virus mang đột biến kháng thuốc là một thách thức. Nghiên cứu đã khảo sát sự thủy phân của các oligopeptit đại diện cho các vị trí cắt này, bao gồm các biến thể tự nhiên và các đột biến kháng thuốc. Kết quả cho thấy các đột biến kháng thuốc luôn mang lại lợi ích về hiệu quả xúc tác. Sự đa dạng trình tự tại các vị trí cắt NC/p1 và p1/p6 không được tối ưu hóa cho quá trình thủy phân nhanh chóng, do đó đột biến tại các vị trí này có thể bù đắp cho hoạt tính xúc tác giảm sút của các proteinase HIV-1 kháng thuốc.

Mục lục chi tiết:

• Effect of sequence polymorphism and drug resistance on two HIV-1 Gag processing sites
• Correspondence to J. Tözsér…
• Abbreviations…
• Enzyme…
• Note…
• (Received 9 May 2002, revised 8 July 2002, accepted 11 July 2002)
• MATERIALS AND METHODS
• Oligopeptide synthesis and characterization
• Construction and purification of HIV-1 PR mutants
• Enzyme assay with oligopeptide substrates
• Active site titration
• Molecular modeling
• RESULTS AND DISCUSSION
• Kinetic parameters for wild-type and mutant HIV-1 proteinase-catalyzed hydrolysis of matrix/capsid Gag cleavage site substrate
• Table 1. Kinetic parameters for the hydrolysis of the oligopeptide representing the matrix/capsid cleavage site of HIV-1 (VSQNY-↓-PIVQ).
• Kinetic parameters for wild-type HIV-1 proteinase-catalyzed hydrolysis of NC/p1 and p1/p6 cleavage site substrates
• Table 2. Processing of peptides representing wild-type HIV-1 Gag NC/p1 and p1/p6 cleavage sites by wild-type HIV-1 proteinase.
• Processing of peptides representing NC/p1 cleavage site sequences by wild-type and mutant HIV-1 proteinases
• Table 3. Processing of peptides representing wild-type and mutant HIV-1 Gag NC/p1 cleavage sites by HIV-1 proteinase. Ratios of specificity constants for substituted over wild-type substrate are shown in parentheses.
• Fig. 1. Sequence around the NC/p1 and p1/p6 cleavage sites in HIV-1.
• Fig. 2. Fitting of various P1′ residues in the p1/p6′ substrate sequence into the S1′ binding site of HIV-1 PR. Space filling models of the Pl’ residue of peptides 7, 10, 11 and 14 (Table 4) are shown occupying the S1′ binding site of wild-type HIV-1 PR.
• Processing of peptides representing p1/p6 cleavage site sequences by wild-type and mutant HIV-1 proteinases
• Table 4. Processing of peptides representing wild-type and mutant HIV-1 p1/p6 Gag cleavage sites by HIV-1 proteinase. Ratios of specificity constants for substituted over wild-type substrate are shown in parentheses.
• CONCLUSIONS
• ACKNOWLEDGEMENTS
• REFERENCES