Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 10 trang
Dung lượng: 225 KB

Giới thiệu nội dung

Early Growth Response-1 Gene (Egr-1) Promoter Induction by Ionizing Radiation in U87 Malignant Glioma Cells In Vitro

Tác giả: Ralph G. Meyer, Jan-Heiner Küpper, Reinhard Kandolf, and H. Peter Rodemann

Lĩnh vực: Radiobiology and Molecular Environmental Research, Molecular Pathology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc tìm hiểu cơ chế gây ra sự hoạt động của Egr-1 promoter khi tiếp xúc với bức xạ ion hóa trong các tế bào u nguyên bào sợi ác tính U87. Các nhà nghiên cứu đã tạo ra các biến thể Egr-1 promoter bị thiếu hụt các vùng nhất định để xác định vai trò của các yếu tố phản ứng với huyết thanh (serum response elements) trong việc cảm ứng bởi bức xạ. Kết quả cho thấy các con đường tín hiệu ERK1/2 và SAPK/JNK có thể tham gia vào quá trình này, nhưng p38MAPK/SAPK2 thì không. Một yếu tố khuếch tán được tiết ra từ các tế bào bị chiếu xạ cũng đóng góp vào sự hoạt động tăng cường của Egr-1 promoter, và hiệu ứng này có thể bị ngăn chặn hoàn toàn bằng suramin.

Mục lục chi tiết:

  • Early growth response-1 gene (Egr-1) promoter induction by ionizing radiation in U87 malignant glioma cells in vitro
  • Correspondence to H. Peter Rodemann
  • Abbreviations: Egr-1, early growth response-1 gene; PDGF, platelet derived growth factor; bFGF, basic fibroblast growth factor; SRE, serum response element; MAPK, mitogen activated protein kinases; TCF, ternary complex factor; SAPK, stress activated protein kinases; Raf, ras-activated factor; ERK, extracellularly regulated kinase; PLC, phospholipase C; FGF, fibroblast growth factor; AP-1, activated protein-1; TRE, thiophorbolester responsive element; EgrBS, Egr-1 binding site; CRE, CAMP responsive element; MCS, multiple cloning site; RSV, Rous sarcoma virus; rhEGF, recombinant human epidermal growth factor; PtdIns3-kinase, phosphatidylinositol 3-kinase; ẞ-Gal, ẞ-galactosidase; PVDF, poly(vinylidene difluoride); ECL, enhanced chemoluminescence; IL, interleukin.
  • Definition: 1 gray (Gy) = 100 rads.
  • (Received 18 July 2001, revised 26 October 2001, accepted 6 November 2001)
  • MATERIALS AND METHODS
  • Cloning of Egr-1 promoter variants
  • Cell culture and transfection procedures/irradiation of transfected cells
  • Inhibitor and activator studies
  • Fetal bovine serum.
  • Recombinant human epidermal growth factor (rhEGF).
  • PD98059.
  • Anisomycin.
  • SB203580.
  • Forskolin.
  • Wortmannin.
  • Suramin.
  • Cell lysis and quantification of reporter gene activities
  • Site-directed mutagenesis
  • Immunoblotting and detection of activated protein factors with phospho-specific antibodies
  • RESULTS
  • Basal activity of Egr-1 promoter variants
  • Fig. 2. Basal activity of Egr-1 promoter variants in U87 glioma cells.
  • Effect of serum, rhEGF and ionizing radiation on promoter activity
  • Fig. 3. Alegr, A5egr and A7egr promoter activities as a function of inhibitors/activators of specific signal transduction pathways.
  • Protein kinase inhibitor/activator studies
  • Fig. 4. Suramin inhibits radiation-induced Egr-1 promoter activation.
  • Western-blot analyses
  • Fig. 5. Immunoblot analyses of activated protein factors in U87 cells using polyclonal phosphospecific antibodies.
  • Fetal bovine serum treatment.
  • RhEGF-treatment.
  • Radiation exposure.
  • PD98059.
  • Anisomycin.
  • SB203580.
  • Forskolin.
  • Wortmannin.
  • DISCUSSION
  • ACKNOWLEDGEMENTS
  • REFERENCES