Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 16 trang
Dung lượng: 1 MB

Giới thiệu nội dung

DNA Binding and Partial Nucleoid Localization of the Chloroplast Stromal Enzyme Ferredoxin:Sulfite Reductase

Tác giả: Kohsuke Sekine, Makoto Fujiwara, Masato Nakayama, Toshifumi Takao, Toshiharu Hase, và Naoki Sato

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Sinh học thực vật

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá khả năng liên kết DNA và vị trí một phần của enzyme ferredoxin:sulfite reductase (SiR) trong nhân bào quan (nucleoid) của lục lạp. Enzyme SiR đóng vai trò quan trọng trong quá trình đồng hóa lưu huỳnh ở thực vật, xúc tác cho phản ứng khử sulfite thành sulfide. Các nhà nghiên cứu đã chứng minh rằng SiR từ đậu Hà Lan (PsSiR) có khả năng liên kết với cả DNA sợi kép và sợi đơn mà không có tính đặc hiệu trình tự đáng kể. Việc liên kết DNA này không ảnh hưởng đến hoạt tính enzyme của PsSiR. So sánh với SiR từ ngô (ZmSiR), PsSiR cho thấy ái lực liên kết DNA và khả năng làm đặc DNA cao hơn. PsSiR cũng làm giảm mạnh mẽ hoạt tính phiên mã trong nhân bào quan của đậu Hà Lan. Qua kính hiển vi miễn dịch huỳnh quang, phần lớn các phân tử SiR được phát hiện đồng định vị với nhân bào quan trong lục lạp của đậu Hà Lan, trong khi ở ngô, sự định vị này không rõ ràng. Kết quả cho thấy SiR có vai trò thiết yếu trong việc làm đặc nhân bào quan trong lục lạp, nhưng mức độ liên kết với nhân bào quan có thể khác nhau giữa các loài thực vật.

Mục lục chi tiết:

  • DNA binding and partial nucleoid localization of the chloroplast stromal enzyme ferredoxin:sulfite reductase
  • Keywords
  • Correspondence
  • Note
  • Abbreviations
  • Abstract
  • Introduction
  • Results
  • Isolation and molecular characterization of a cDNA clone encoding pea SiR
  • Figure 1. Comparison of the amino acid sequences of different SiRs.
  • Figure 2. Phylogenetic tree of SiRs based on amino acids sequences.
  • Basic characterization of the PsSiR gene
  • Figure 3. Basic characterization of PsSiR.
  • Figure 4. UV-visible absorption spectrum and SDS/PAGE analysis of purified recombinant PsSiR.
  • Effects of DNA binding on sulfite reductase activity
  • Figure 7. Measurement of enzymatic activity of DNA-bound PsSiR.
  • Characteristics of pea SiR with respect to maize SiR
  • Figure 5. DNA binding activity of SiRs.
  • Figure 6. Sequence specificity for DNA-binding by SiRs.
  • Figure 8. Compaction of chloroplast DNA by SiRs.
  • Figure 9. Effects of SiRs on the transcriptional activity of nucleoids from mature and developing chloroplasts.
  • Intrachloroplast localization of SiR
  • Figure 10. Intrachloroplast localization of SiR.
  • Discussion
  • Comparative aspects of SiR
  • Relationship between DNA binding and enzymatic activity of SiR
  • Experimental procedures
  • Plant materials and growth conditions
  • Preparation of chloroplasts and nucleoids
  • Screening cDNA Libraries
  • Phylogenetic analysis
  • DNA and RNA blot hybridization
  • Immunoblot analysis
  • MALDI-TOF/MS
  • Preparation of recombinant SiR
  • Gel-mobility shift assay
  • Measurement of SiR enzymatic activity
  • In vitro compaction of DNA
  • In vitro transcription assay
  • Indirect immunofluorescence microscopy
  • Acknowledgements
  • References
  • Supplementary material