Báo cáo Y học: Disul®de bond formation through Cys186 facilitates functionally relevant dimerization of trimeric hyaluronan-binding protein 1 (HABP1)/p32/gC1qR

Disulfide Bond Formation Through Cys186 Facilitates Functionally Relevant Dimerization of Trimeric Hyaluronan-Binding Protein 1 (HABP1)/p32/gC1qR

Tác giả: Babal Kant Jha, Dinakar M. Salunke, Kasturi Datta

Lĩnh vực: Biochemistry Laboratory, School of Environmental Sciences, Jawaharlal Nehru University, New Delhi, India; Structural Biology Unit, National Institute of Immunology, Aruna Asaf Ali Marg, New Delhi, India

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của liên kết disulfide qua Cys186 trong việc tạo thành dạng dimer hóa chức năng của protein 1 liên kết hyaluronan (HABP1). HABP1, một protein đa chức năng, tồn tại dưới nhiều dạng oligomeric khác nhau, bao gồm trimer không cộng hóa trị và dimer của trimer liên kết cộng hóa trị (hexamer). Việc hình thành hexamer được thúc đẩy bởi quá trình oxy hóa nhóm thiol và có thể bị chặn bởi sự biến đổi Cys186. Dạng hexamer cho thấy ái lực gắn kết cao hơn đối với hyaluronan, đầu tròn của bổ thể C1q (gC1q) và BSA được gắn mannose so với dạng trimer. Các kết quả cho thấy trạng thái oligomer hóa và cấu trúc chặt chẽ của HABP1 điều chỉnh chức năng của nó, đặc biệt là trong việc tương tác với các phối tử khác nhau. Nghiên cứu này cũng xem xét các quá trình chuyển đổi cấu trúc của HABP1 và ảnh hưởng của chúng đến ái lực gắn kết phối tử.

Mục lục chi tiết:

• Disulfide bond formation through Cys186 facilitates functionally relevant dimerization of trimeric hyaluronan-binding protein 1 (HABP1)/p32/gC1qR
• Hyaluronan-binding protein 1 (HABP1), a ubiquitous multifunctional protein, interacts with hyaluronan, globular head of complement component 1q (gC1q), and clustered mannose and has been shown to be involved in cell signalling.
• Keywords: clustered mannose; hyaluronan; hyaluronan-binding protein 1 (HABP1); oligomerization; p32.
• Hyaluronan-binding protein 1 (HABP1), a 68-kDa protein, was originally purified as a novel receptor of hyaluronan, an important component of the extracellular matrix [1].
• Correspondence to K. Datta, Biochemistry Laboratory, School of Environmental Sciences, Jawaharlal Nehru University, New Delhi-110 067, India.
• Abbreviations: BCIP, 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate; gClq, globular head of complement component 1q; HABP1, hyaluronan-binding protein 1; NBT, nitro blue tetrazolium.
• MATERIALS AND METHODS
• Materials
• Purification of HABP1 and preparation of its polyclonal antibodies
• Electrophoresis and immunodetection
• Gel-permeation chromatography of HABP1
• Chemical modification of HABP1
• Covalent cross-linking of HABP1 subunits
• Copper-phenanthroline-induced disulfide linkage of HABP1
• HgCl2-induced disulfide linkage of HABP1
• Estimation of thiol group
• Fluorescence measurement
• Biotinylation of hyaluronan, D-mannosylated BSA and HABP1, and their use in binding assays
• RESULTS
• Existence of two oligomeric forms of HABP1
• Fig. 1. HABP1 exists in two different oligomeric forms in solution.
• Oligomeric transitions
• Fig. 2. Oligomeric states of HABP1 in solution.
• Fig. 3. Evidence for oligomeric structural transition of HABP1.
• Fig. 4. Dimerization of trimeric HABP1 through Cys186.
• Oligomeric transitions and ligand affinity
• DISCUSSION
• Fig. 5. Higher affinity of the hexameric form of HABP1 for its ligand.
• ACKNOWLEDGEMENTS
• REFERENCES