Báo cáo khoa học: Deflavination and reconstitution of flavoproteins Tackling fold and function

Deflavination and Reconstitution of Flavoproteins

Tác giả: Marco H. Hefti, Jacques Vervoort và Willem J. H. van Berkel

Lĩnh vực: Hóa sinh

Nội dung tài liệu: Bài viết tổng quan về lĩnh vực deflavination (loại bỏ flavin) và tái cấu trúc (reconstitution) các flavoprotein. Các flavoprotein là những protein redox phổ biến, đóng vai trò quan trọng trong nhiều quá trình sinh học. Phần lớn flavoprotein có nhóm gắn flavin không cộng hóa trị. Việc phân ly thuận nghịch các flavoprotein thành apoprotein và nhóm gắn flavin mang lại những hiểu biết sâu sắc về quá trình gấp cuộn, chức năng và cơ chế hoạt động của chúng. Việc thay thế nhóm gắn flavin tự nhiên bằng các flavin nhân tạo đã chứng tỏ hiệu quả trong việc xác định khả năng tiếp cận dung môi, độ phân cực, cơ chế phản ứng và động học của các vị trí hoạt động trong flavoprotein. Bài báo này tóm tắt các tiến bộ trong lĩnh vực này, thảo luận về các quy trình sắc ký tinh vi để tách flavin hoặc tái cấu trúc flavoprotein trên quy mô lớn. Đối với một số flavoprotein, nhóm gắn flavin được gắn cộng hóa trị vào chuỗi polypeptide. Các nghiên cứu từ hệ thống biểu hiện thiếu riboflavin và đột biến định hướng tại chỗ đã gợi ý rằng quá trình gắn flavin là một quá trình sau dịch mã, thay vì đồng dịch mã. Các phương pháp di truyền này cũng cung cấp cái nhìn sâu sắc về cơ chế gắn flavin cộng hóa trị và lý do cho sự sửa đổi protein bất thường này.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Thermodynamics of flavin binding
• Flavin analogs
• Preparation and reconstitution of apoflavoproteins
• Conventional methods
• Chromatographic procedures
• Ion-exchange chromatography
• Hydrophobic interaction chromatography
• Hydroxyapatite chromatography
• Dye-affinity chromatography
• Covalent chromatography
• Immobilized metal-affinity chromatography
• Deflavination of covalent flavoproteins
• Conclusions and future perspectives
• References