Báo cáo khoa học: Comparative studies of endonuclease I from cold-adapted Vibrio salmonicida and mesophilic Vibrio cholerae

Comparative Studies Of Endonuclease I From Cold-Adapted Vibrio Salmonicida And Mesophilic Vibrio Cholerae

Tác giả: Bjørn Altermark, Laila Niiranen, Nils P. Willassen, Arne O. Smalås, and Elin Moe

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Hóa sinh

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này so sánh hai enzyme endonuclease I từ vi khuẩn Vibrio salmonicida (một loài ưa lạnh) và Vibrio cholerae (một loài ưa ấm). Hai enzyme này đã được biểu hiện, tinh sạch và so sánh về các đặc tính enzyme. Kết quả cho thấy có sự khác biệt đáng kể về yêu cầu NaCl, pH tối ưu, độ bền nhiệt và hiệu suất xúc tác giữa hai enzyme. Enzyme từ V. salmonicida (VsEndA) thể hiện các đặc điểm điển hình của enzyme ưa lạnh như nhiệt độ biến tính thấp hơn, nhiệt độ tối ưu hoạt động thấp hơn và hoạt tính riêng cao hơn so với enzyme từ V. cholerae (VcEndA). Các tham số nhiệt động lực học cũng xác nhận bản chất ưa lạnh của VsEndA với enthalpy hoạt hóa thấp hơn đáng kể. Điều kiện tối ưu cho hoạt động enzyme phù hợp với điều kiện sinh trưởng tương ứng của các sinh vật, và các enzyme này chủ yếu hoạt động như DNase ở nồng độ NaCl sinh lý. Vị trí ngoại bào hoặc chu chất của enzyme có thể giải thích sự tinh chỉnh các đặc tính sinh hóa này.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Keywords
• Correspondence
• Abstract
• Results
• Sequence similarity and composition
• Expression and purification
• Enzyme properties
• Substrate specificity analysis
• Discussion
• Conclusion
• Experimental procedures
• Bacterial strains and molecular biology materials
• Construction of the expression plasmids
• Enzyme expression and purification
• Enzyme analysis
• Enzyme assay
• [NaCI] optimum, pH optimum, temperature optimum
• Enzyme kinetic measurements
• Stability measurements
• Measurement of substrate specificity
• Acknowledgements
• References