Báo cáo Y học: Cloning and expression of two novel aldo-keto reductases from Digitalis purpurea leaves

Cloning and expression of two novel aldo-keto reductases from Digitalis purpurea leaves

Tác giả: Isabel Gavidia, Pedro Pérez-Bermúdez, H. Ulrich Seitz

Lĩnh vực: Sinh học phân tử thực vật, Hóa sinh thực vật

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này tập trung vào việc phân lập và biểu hiện hai gen mới thuộc họ aldo-keto reductase (AKR) từ lá cây Digitalis purpurea. Các protein AKR này được cho là có vai trò quan trọng trong con đường sinh tổng hợp cardiac glycosides, một nhóm các hợp chất tự nhiên có giá trị y học. Các nhà khoa học đã thành công trong việc xác định trình tự DNA, biểu hiện và tinh sạch các protein tái tổ hợp DpAR1 và DpAR2 trong vi khuẩn E. coli. Kết quả cho thấy các protein này có hoạt tính reductase đối với cả đường và steroid, với sự ưa thích đối với NADH làm đồng yếu tố. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng các gen DpAR được biểu hiện đặc hiệu ở lá và có sự điều hòa phát triển. Ngoài ra, biểu hiện gen AKR còn được tăng cường bởi các yếu tố gây stress như tổn thương, nồng độ muối cao, khô hạn và sốc nhiệt. Phát hiện này mở ra hướng hiểu biết sâu sắc hơn về vai trò của các enzyme AKR trong trao đổi chất steroid ở thực vật và tiềm năng ứng dụng trong lĩnh vực dược phẩm.

Mục lục chi tiết:

• Cloning and expression of two novel aldo-keto reductases from Digitalis purpurea leaves
• Keywords: aldo-keto reductases; cardenolide biosynthesis; Digitalis purpurea; gene expression.
• Introduction
• Materials and Methods
• Plant materials
• Construction and screening of cDNA library
• DNA sequence analysis
• Plant treatments
• Nucleic acid isolation and analysis
• Expression and purification of recombinant DpAR proteins
• Results
• Isolation and sequence analysis of aldose reductase (AR) cDNAs from D. purpurea
• Genomic organization of D. purpurea AR genes
• Heterologous expression of DpARs in E. coli
• Discussion
• Expression of DpAR genes
• Acknowledgements
• References