Báo cáo Y học: Brassica napus soluble epoxide hydrolase (BNSEH1) Cloning and characterization of the recombinant enzyme expressed in Pichia pastoris

Brassica napus soluble epoxide hydrolase (BNSEH1): Cloning and characterization of the recombinant enzyme expressed in Pichia pastoris

Tác giả: Stefan Bellevik, Jiaming Zhang, Johan Meijer

Lĩnh vực: Sinh học thực vật, Di truyền học

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này báo cáo về việc phân lập và đặc tính hóa một enzyme epoxide hydrolase hòa tan (sEH) từ cây cải dầu (Brassica napus), được gọi là BNSEH1. Enzyme này đã được biểu hiện tái tổ hợp trong nấm men Pichia pastoris. BNSEH1 có vai trò trong quá trình trao đổi chất của axit béo epoxy và phản ứng phòng vệ. Enzyme này là một protein hòa tan, có khối lượng phân tử khoảng 37 kDa và có hoạt tính cao đối với trans-stilbene oxide (TSO) so với cis-stilbene oxide (CSO). Nhiệt độ tối ưu cho hoạt động của enzyme là 55 °C và pH tối ưu là 6-7. Việc phân lập BNSEH1 mở ra tiềm năng cho kỹ thuật di truyền để nghiên cứu chức năng của quá trình trao đổi chất axit béo epoxy và cải thiện thành phần dầu hạt trong loại cây trồng quan trọng này.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials
• Cloning of B. napus sEH
• 5′-Rapid amplification of cDNA ends (RACE)
• Cloning of BNSEH1 into pPIC3.5K and expression in P. pastoris
• Purification of recombinant BNSEH1
• Western Blot analysis
• Oligomerization analysis of BNSEH1 by gel filtration
• Catalytic characterization of recombinant BNSEH1
• RESULTS
• Cloning of BNSEH1
• Expression in yeast and purification of recombinant BNSEH1
• Physico-chemical properties of recombinant BNSEH1
• Gel filtration analysis of recombinant BNSEH1
• Biochemical characterization of recombinant BNSEH1
• Effects of inhibitors on recombinant BNSEH1 enzyme activity
• DISCUSSION
• ACKNOWLEDGEMENTS
• REFERENCES