Báo cáo ” Tinh sạch và nghiên cứu một số đặc điểm của xylanase từ chủng Aspergillus niger ĐB 106 “

TINH SẠCH VÀ NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM CỦA Xylanase TỪ CHỦNG ASPERGILLUS NIGER ĐB 106

Tác giả: Trần Hữu Phong, Mai Thị Hằng, Phương Phú Công, Vũ Ngọc Hạnh

Lĩnh vực: Công nghệ Sinh học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc tinh sạch và khảo sát các đặc điểm của enzyme xylanase P, một endoxylanase chiếm ưu thế trong tổ hợp xylanase do chủng Aspergillus niger DB 106 sản xuất khi lên men bề mặt trên môi trường rắn sử dụng lõi ngô làm nguồn carbon. Enzyme xylanase P đã được tinh sạch đến đồng nhất thông qua quy trình bốn bước sắc ký sử dụng hệ thống FPLC, bao gồm sắc ký trao đổi ion và sắc ký lọc gel. Các đặc tính lý hóa quan trọng của xylanase P đã được xác định, bao gồm khối lượng phân tử ước tính là 32 kDa qua điện di SDS-PAGE. Enzyme này thể hiện hoạt động tối ưu ở nhiệt độ 55°C và pH 5,5, đồng thời cho thấy độ bền trong một dải pH rộng từ 2,5 đến 8,0. Tuy nhiên, enzyme này không bền nhiệt, mất hoạt tính ở 60°C. Động học enzyme cho thấy giá trị Vmax và Km tương ứng là 20.000 IU.mg⁻¹ và 38 mg.ml⁻¹ khi sử dụng oat spelt xylan (OSX) không tan làm cơ chất. Xylanase P bị ức chế nhẹ bởi một số ion kim loại như Zn²⁺, Mn²⁺, Fe²⁺, Hg²⁺, nhưng không bị ảnh hưởng bởi các ion khác và EDTA. Kết quả phân tích sản phẩm thủy phân OSX bằng sắc ký bản mỏng cho thấy xylanase P là một endoxylanase, phân giải xylan thành các xylooligosaccharide chuỗi ngắn và một lượng nhỏ xylose, và không có hoạt tính cellulase, β-galactosidase, amylase hay β-xylodase.

Mục lục chi tiết:

• SUMMARY
• INTRODUCTION
• MATERIALS AND METHODS
• Microorganism and culture medium
• Methods
• Activity assays
• Protein assays
• Xylanase purification
• Molecular mass estimation and zymogram analysis
• RESULTS AND DISCUSSION
• Enzyme purification
• Molecular mass and zymogram analysis
• Determination of Vmax and Km values
• Substrate specificity of xylanase P
• Effect of temperature, pH and metal ion
• CONCLUSION
• Acknowledgement
• REFERENCES