Báo cáo ” Cố định vi khuẩn bằng hyđroxide kim loại làm tăng độ nhạy của phương pháp PCR khi phát hiện vi khuẩn trong thực phẩm “

Immobilization With Metal Hydroxides As A Mean To Concentrate Food Pathogens For Increasing Sensitivity Of PCR Based Detection Method

Tác giả: Do Thi Thu Huong, Sudip K Rakshit

Lĩnh vực: Nông nghiệp, Công nghệ Sinh học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày một phương pháp hiệu quả để phát hiện vi khuẩn gây bệnh trong thực phẩm bằng cách sử dụng phản ứng chuỗi polymerase (PCR). Phương pháp này kết hợp việc cố định vi khuẩn bằng hydroxide kim loại và xử lý bằng enzyme DNase I để loại bỏ DNA từ các tế bào chết, từ đó giảm thiểu kết quả dương tính giả. Sử dụng thuốc nhuộm SYBR Green I trong phản ứng PCR thời gian thực giúp định lượng DNA được nhân lên và xác định số lượng vi khuẩn ban đầu. Nghiên cứu đã chứng minh tỷ lệ thu hồi vi khuẩn sau khi cố định bằng hydroxide kim loại đạt từ 93,6% đến 99,3%, cao hơn đáng kể so với phương pháp không cố định (31,5% – 54,7%). Phương pháp này cũng cho phép cô đặc mẫu đến 50 lần, tăng cường độ nhạy của PCR và xác định được giới hạn phát hiện cho các loại vi khuẩn như E. coli O157:H7, L. monocytogenes, E. coli wild type và S. typhimurium ở nồng độ thấp trong mẫu sữa tươi.

Mục lục chi tiết:

• SUMMARY
• INTRODUCTION
• MATERIALS AND METHODS
• Bacterial strains
• Metal hydroxide preparation
• Preparation of aliquots of cell suspensions
• DNA isolation
• PCR primers
• Real time PCR amplifications
• Gel electrophoresis
• Standard curve for bacterial strains in real-time PCR assay
• Evaluation of bacterial immobilization with metal hydroxides by real-time PCR
• Feasibility of DNase I treatment in discriminating viable and unviable bacterial cells immobilized by zirconium hydroxide in food model (1 ml of whole milk)
• Sensitivity of DTD-PCR in detecting metal hydroxide immobilized bacteria in food application (10 ml of whole milk)
• RESULTS
• Standard curves in real-time PCR assay
• DISCUSSION
• CONCLUSION
• Acknowledgement
• REFERENCES