Atrial Natriuretic Peptide-Dependent Photolabeling of a Regulatory ATP-Binding Site on the Natriuretic Peptide Receptor-A

Tác giả: Simon Joubert, Christian Jossart, Normand McNicoll, and André De Léan

Lĩnh vực: Pharmacology, Faculty of Medicine, Université de Montréal, Montréal, Québec, Canada

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá sự tương tác trực tiếp giữa ATP và thụ thể peptide natriuretic loại A (NPR-A), tập trung vào miền tương đồng kinase (KHD). Các thí nghiệm sử dụng một chất tương tự ATP nhạy cảm với ánh sáng để đánh dấu trực tiếp miền KHD của NPR-A, đặc biệt là khi có sự hiện diện của peptide natriuretic tâm nhĩ (ANP). Kết quả cho thấy sự gắn kết ATP vào KHD là một quá trình hợp tác và điều chỉnh chặt chẽ cả hoạt động guanylyl cyclase và sự gắn kết ANP của thụ thể. Phát hiện này làm sáng tỏ vai trò của miền KHD trong việc điều hòa hoạt động của NPR-A.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results
• Effect of ATP on NPR-A GC activity
• Effect of ATP on 125I-labeled ANP binding
• 8-Azido-3′-biotinyl-ATP inhibition of NPR-A GC activity
• Effect of 8-azido-ATP-B on binding of 125I-labeled ANP to NPR-A-AGC
• 8-azido-ATP-B labeling of NPR-A-AGC
• Competition of photoaffinity labeling of AGC by ATP
• Discussion
• Experimental procedures
• Materials
• Expression vectors
• Cell culture and transient or stable expression in HEK293 cells
• Membrane preparations
• Immunoblot analysis
• Synthesis of 8-azido-3′-biotinyl-ATP
• Photolabeling procedure
• Receptor binding assays
• Guanylyl cyclase activity
• Data analysis and statistics
• Acknowledgements
• References