Báo cáo khoa học: A novel phosphorylated glycoprotein in the shell matrix of the oyster Crassostrea nippona

A Novel Phosphorylated Glycoprotein in the Shell Matrix of the Oyster Crassostrea Nippona

Tác giả: Tetsuro Samata, Daisuke Ikeda, Aya Kajikawa, Hideyoshi Sato, Chihiro Nogawa, Daishi Yamada, Ryo Yamazaki and Takahiro Akiyama

Lĩnh vực: Laboratory of Cell Biology, Faculty of Environmental Health, Azabu University, Sagamihara, Japan

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này mô tả việc phát hiện một glycoprotein ma trận mới, MPP1, có trọng lượng phân tử 52 kDa trong vỏ sò Crassostrea nippona. Protein này có tính axit cao và được phosphoryl hóa mạnh mẽ. Phân tích trình tự cDNA cho thấy cấu trúc theo mô-đun với các chuỗi lặp lại giàu Asp, Ser và Gly, đặc biệt là chuỗi giàu DE. MPP1 và các polymer của nó có đặc tính tích lũy và giữ Ca²⁺, đóng vai trò quan trọng trong quá trình khoáng hóa vỏ sò. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng MPP1 là thành phần ma trận hữu cơ đầu tiên được biểu hiện ở cả lớp phiến và lớp lăng trụ của cấu trúc vỏ động vật thân mềm. Thử nghiệm kết tinh trong ống nghiệm cho thấy MPP1 có khả năng điều khiển sự phát triển tinh thể và cấu trúc vỏ.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Database
• Abstract
• Introduction
• Results
• Biochemical characterization of the OM components extracted from oyster shell
• Figure 1. SDS/PAGE electrophoretogram of GISM in the OM of C. nippona.
• Table 1. Amino acid compositions of the 52 kDa component and the SM of C. nippona together with that of the deduced 44 kDa protein.
• Figure 2. SDS/PAGE electrophoretogram of (A) dephosphorylated GISM and (B) deglycosylated GISM.
• Figure 3. FTIR spectrum of the GISM fraction.
• Cloning and sequencing of cDNA encoding the OM component in the foliated layer
• Figure 4. Nucleotide sequence of the 1.9 kb cDNA and deduced amino acid sequence.
• Deduced protein structure encoded by the 1.9 kb cDNA
• Figure 5. Schematic representation of the domain structures of MPP1 and MSP-1.
• Figure 6. Alignment of the amino acid sequences of MPP1 and MSP-1.
• Tissue specific expression of a transcript of the 1.9 kb cDNA
• Figure 7. Electrophoretogram of a transcript of the 1.9 kb cDNA by northern hybridization.
• In vitro assay of OM activity
• Figure 8. Surface views of crystals induced by ‘CaCO3 crystal growth assay’.
• Figure 9. Recordings of CaCO3 precipitation by ‘CaCO3 precipitation assay’.
• Discussion
• Experimental procedures
• Molluscan materials
• Extraction and purification of the organic matrix proteins
• Amino acid composition and N-terminal sequence analysis
• Enzymatic digestion and LC/MS/MS analysis
• Deglycosylation and dephosphorylation experiments
• FTIR analysis
• cDNA cloning
• Tissue collection for RNA extraction
• Total RNA extraction
• PCR amplification
• TA cloning
• Sequencing
• Northern blot hybridization
• In vitro crystallization assay
• Acknowledgements
• References