Báo cáo khoa học: A L225A substitution in the human tumour suppressor HIC1 abolishes its interaction with the corepressor CtBP

A L225A Substitution in the Human Tumour Suppressor HIC1 Abolishes Its Interaction with the Corepressor CtBP

Tác giả: Nicolas Stankovic-Valentin, Alexis Verger, Sophie Deltour-Balerdi, Kate G. R. Quinlan, Merlin Crossley, Dominique Leprince

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Di truyền học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá mối tương tác giữa protein ức chế khối u HIC1 và các protein đồng ức chế CtBP1 và CtBP2. HIC1, nằm trên nhiễm sắc thể 17p13.3, đóng vai trò quan trọng trong việc ức chế sự phát triển của khối u và liên quan đến hội chứng Miller-Dieker. Nghiên cứu chỉ ra rằng một đột biến điểm Leu225 thành Alanine (L225A) trong motif liên kết CtBP của HIC1 làm mất hoàn toàn khả năng tương tác của HIC1 với cả CtBP1 và CtBP2. Sự tương tác này được điều chỉnh bởi nồng độ NADH, cho thấy mối liên hệ giữa tín hiệu NAD+/NADH và quá trình ức chế phiên mã của HIC1. Đột biến L225A cũng làm suy giảm đáng kể khả năng ức chế phiên mã của HIC1, nhấn mạnh vai trò thiết yếu của tương tác HIC1-CtBP trong chức năng ức chế khối u và phát triển bình thường. Nghiên cứu cũng đề xuất rằng các mô hình động vật mang đột biến này có thể hữu ích cho việc nghiên cứu vai trò của tương tác HIC1-CtBP trong ung thư và phát triển.

Mục lục chi tiết:

• Abstract
• Keywords
• Introduction
• Results
• The integrity of the substrate-binding domain of CtBP2 is required for recognition of the GLDLSKK motif
• Point mutation of the only invariant residue in the CtBP-interacting domain is sufficient to abolish the HIC1-CtBP interaction
• The HIC1 central region functions as a CtBP-dependent and CtBP-independent autonomous repression domain
• Discussion
• Experimental procedures
• Constructs
• Yeast two-hybrid system
• Cell culture and transfection
• Immunoprecipitation and coimmunoprecipitation
• Repression and mammalian two-hybrid assays
• Western blot and antibodies
• Acknowledgements
• References