Unraveling multistate unfolding of pig kidney fructose-1,6-bisphosphatase using single tryptophan mutants

Unraveling Multistate Unfolding Of Pig Kidney Fructose-1,6-bisphosphatase Using Single Tryptophan Mutants

Tác giả: Heide C. Ludwig, Fabian N. Pardo, Joel L. Asenjo, Marco A. Maureira, Alejandro J. Yañez and Juan C. Slebe

Lĩnh vực: Biochemistry, Molecular Biology, Protein Chemistry

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày một phương pháp tiếp cận mới để nghiên cứu quá trình gấp/mở của enzyme fructose-1,6-bisphosphatase (FBPase) từ thận lợn. Do enzyme ban đầu không chứa tryptophan, các nhà nghiên cứu đã tạo ra bốn dạng đột biến mang một gốc tryptophan duy nhất tại các vị trí khác nhau của enzyme. Các dạng đột biến này vẫn giữ được phần lớn các đặc tính cấu trúc và động học của enzyme ban đầu. Bằng cách sử dụng các kỹ thuật như quang phổ huỳnh quang, sắc ký lỏng hiệu năng cao và đo hoạt tính xúc tác, nghiên cứu đã cung cấp bằng chứng thực nghiệm đầu tiên cho thấy sự gián đoạn của giao diện C1-C2 xảy ra trước sự gián đoạn của giao diện C1-C4 trong quá trình mở hóa của FBPase do guanidine hydrochloride (GdmCl). Các kết quả cũng cho thấy sự tồn tại của nhiều trạng thái trung gian, bao gồm cả các trạng thái xúc tác hoạt động, trong quá trình mở hóa đa trạng thái này.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Phương pháp nghiên cứu (chuẩn bị protein, đo hoạt tính enzyme, nghiên cứu mở hóa trạng thái cân bằng, nghiên cứu tái hoạt hóa, sắc ký lỏng loại trừ kích thước, đo quang phổ huỳnh quang nội tại và tương tác ANS, thực nghiệm đo quang phổ huỳnh quang)
• Phân tích biểu đồ pha của dữ liệu huỳnh quang tryptophan
• Thảo luận
• Kết luận