A Novel Factor XI Missense Mutation (Val371Ile) in the Activation Loop Is Responsible for a Case of Mild Type II Factor XI Deficiency

A Novel Factor XI Missense Mutation (Val371Ile) in the Activation Loop is Responsible for a Case of Mild Type II Factor XI Deficiency

Tác giả: Cristina Bozzao, Valeria Rimoldi, Rosanna Asselta, Meytal Landau, Rossella Ghiotto, Maria L. Tenchini, Raimondo De Cristofaro, Giancarlo Castaman and Stefano Duga

Lĩnh vực: Coagulation factor XI deficiency; functional characterization; missense mutation; mutational screening; type II defect

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này mô tả việc xác định và đặc tính hóa chức năng của một đột biến missense mới, Val371Ile, trong gen yếu tố đông máu XI (FXI) ở một bệnh nhân nam người Ý 25 tuổi mắc chứng thiếu hụt FXI loại II thể nhẹ. Phân tích phòng thí nghiệm cho thấy mức độ hoạt động chức năng của FXI giảm (34%) nhưng mức độ kháng nguyên bình thường (102%), đặc trưng cho kiểu đột biến loại II. Nghiên cứu đã thực hiện các thử nghiệm biểu hiện protein FXI tái tổ hợp mang đột biến Val371Ile, sau đó là các thử nghiệm hoạt hóa. Kết quả cho thấy thời gian hoạt hóa FXI bị thay đổi và sự chậm trễ nhẹ trong quá trình hoạt hóa yếu tố IX bởi FXI đã hoạt hóa bởi thrombin. Các phát hiện này chỉ ra rằng đột biến Val371Ile ảnh hưởng đến quá trình hoạt hóa FXI và/hoặc hoạt động của FXIa, góp phần gây ra tình trạng thiếu hụt FXI loại II. Nghiên cứu cũng thảo luận về vị trí của axit amin Val371 trong cấu trúc của FXI và khả năng ảnh hưởng của sự thay thế này đến chức năng protein.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Results
• Patient data
• Mutational screening
• Expression of wild-type and Val371Ile recombinant FXI in COS-1 cells
• FXI activation
• Activation of FIX by FXIa
• Discussion
• Experimental procedures
• Blood collection and genomic DNA extraction
• Coagulation studies
• PCR amplifications and DNA sequencing
• Site-directed mutagenesis
• Proteins and antibodies
• Cell culture
• Expression of recombinant proteins
• FXI measurement in conditioned media and in cell lysates
• Activation of FXI
• Western blotting analysis
• Assay of FXI activation
• Structural analysis
• Evolutionary conservation analysis
• Acknowledgements