Construction of a novel detection system for protein-protein interactions using yeast G-protein signaling

Construction of a novel detection system for protein-protein interactions using yeast G-protein signaling

Tác giả: Nobuo Fukuda, Jun Ishii, Tsutomu Tanaka, Hideki Fukuda, Akihiko Kondo
Lĩnh vực: Department of Chemical Science and Engineering, Graduate School of Engineering, Kobe University, Japan; Organization of Advanced Science and Technology, Kobe University, Japan

Nghiên cứu này trình bày việc xây dựng một hệ thống mới để phát hiện tương tác protein-protein, tận dụng tín hiệu G-protein trong nấm men. Hệ thống này dựa trên nguyên lý hoạt động của Gy subunit trong tín hiệu G-protein, vốn yêu cầu sự neo đậu vào màng tế bào chất thông qua biến đổi lipid. Bằng cách tạo ra các biến thể Gy bị khiếm khuyết khả năng neo đậu màng (Gycyto), hệ thống có thể phát hiện tương tác protein-protein khi chúng khôi phục khả năng định vị màng này, qua đó tái kích hoạt chuỗi tín hiệu G-protein.

Hệ thống được phát triển cho phép đánh giá định lượng các tương tác này thông qua các phép đo ức chế tăng trưởng (chọn lọc âm tính) và phân tích biểu hiện gen EGFP (chọn lọc dương tính). Một ưu điểm nổi bật của phương pháp này là khả năng hoạt động ở nhiệt độ 30°C, thuận lợi cho sự phát triển nhanh của nấm men, đồng thời cho phép phân biệt các mức độ ái lực khác nhau của tương tác. Nghiên cứu đã sử dụng cặp tương tác mô hình là domain ZZ của Staphylococcus aureus và Fc của kháng thể miễn dịch IgG người để chứng minh tính hiệu quả và linh hoạt của hệ thống.