Identification Of The Structural Determinant Responsible For The Phosphorylation Of G-Protein Activated Potassium Channel 1 By Camp-Dependent Protein Kinase

Identification of the structural determinant responsible for the phosphorylation of G-protein activated potassium channel 1 by cAMP-dependent protein kinase

Tác giả: Carmen Müllner, Bibiane Steinecker, Astrid Gorischek and Wolfgang Schreibmayer

Lĩnh vực: Department of Biophysics, Center for Physiological Medicine, Medical University of Graz, Austria

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định các yếu tố cấu trúc chịu trách nhiệm cho sự phosphoryl hóa của kênh kali K+ phụ thuộc G-protein (GIRK1) bởi cAMP-dependent protein kinase (PKA). Các thí nghiệm phosphoryl hóa ngược đã chứng minh rằng tiểu đơn vị GIRK1 có thể bị phosphoryl hóa trong cơ thể sống khi có sự hoạt hóa của PKA. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng một vùng đặc biệt ở C-terminus của GIRK1, cụ thể là các amino acid Serine 385, Serine 401 và Threonine 407, là các vị trí quan trọng cho sự phosphoryl hóa này. Sự biến đổi gen của ba vị trí này đã làm giảm đáng kể ảnh hưởng của việc tiêm cAMP lên dòng điện qua kênh GIRK1. Dữ liệu thu thập được cung cấp thông tin về các yếu tố cấu trúc chịu trách nhiệm cho sự phosphoryl hóa bởi PKA và sự điều hòa của các kênh GIRK.

Mục lục chi tiết:

• Structured digital abstract
• Introduction
• Results
• Back-phosphorylation of GIRK1
• Structural determinant responsible for PKA phosphorylation in vitro
• Functional aspects of mutation of S385, S401 and T407
• Discussion
• Experimental procedures
• Antibodies, reagents and solutions
• Immunoprecipitation
• Back-phosphorylation
• Genetic engineering
• Recombinant protein purification
• In vitro phosphorylation
• Xenopus laevis oocyte expression
• Electrophysiology
• Statistical analysis
• Acknowledgements
• References