Structural and mutational analysis of TenA protein (HP1287) from the Helicobacter pylori thiamin salvage pathway – evidence of a different substrate specificity

Structural and Mutational Analysis of TenA Protein (HP1287) from the Helicobacter Pylori Thiamin Salvage Pathway – Evidence of a Different Substrate Specificity

Tác giả: Nicola Barison, Laura Cendron, Alberto Trento, Alessandro Angelini, Giuseppe Zanotti

Lĩnh vực: Sinh hóa học, Cấu trúc Protein

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này trình bày phân tích cấu trúc và đột biến của protein TenA (HP1287) từ Helicobacter pylori, một thành viên của con đường salvage thiamin. Protein TenA đã được biểu hiện và tinh sạch, và cấu trúc tinh thể của protein dạng hoang dã cùng với dạng đột biến F47Y đã được xác định. Các cấu trúc cho thấy TenA thuộc lớp thiaminase II, một nhóm enzyme có vai trò trong việc tổng hợp tiền chất thiamin hydroxypyrimidine. Tuy nhiên, các phép đo hoạt động enzyme cho thấy hoạt tính của TenA từ H. pylori đối với cơ chất giả định 4-amino-5-aminomethyl-2-methylpyrimidine là rất khiêm tốn. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng đột biến tại vị trí 47, một vị trí có phenylalanin trong tất cả các chủng H. pylori được giải trình tự cho đến nay, là không đủ để giải thích hoạt động xúc tác rất thấp đối với cơ chất dự kiến. Dựa trên sự khác biệt về môi trường thuộc địa hóa và các đặc điểm cấu trúc cũng như xúc tác của TenA, nghiên cứu đề xuất một vai trò quan trọng tiềm năng cho enzyme H. pylori trong con đường sinh tổng hợp thiamin, phù hợp với tầm quan trọng của protein này trong quá trình thuộc địa hóa dạ dày.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Kết quả
• Cấu trúc tinh thể của TenA dạng hoang dã
• Cấu trúc tinh thể của biến thể TenA F47Y
• Hoạt tính enzyme và vị trí xúc tác tiềm năng
• Các enzyme khác tham gia vào con đường thiamin
• Thảo luận
• Thủ tục thực nghiệm
• Nuôi cấy, biểu hiện, tinh sạch và kết tinh
• Thu thập và xác định cấu trúc dữ liệu
• Kiểm tra hoạt tính enzyme
• Tài liệu tham khảo