Drosophila proteins involved in metabolism of uracil-DNA possess different types of nuclear localization signals

Tác giả: Gábor Merényi, Emese Kónya, Beáta G. Vértessy

Lĩnh vực: Enzymology, Biological Research Center, Hungarian Academy of Sciences; Applied Biotechnology, Budapest University of Technology and Economics

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định và mô tả các tín hiệu định vị hạt nhân (NLS) ở các protein của ruồi giấm Drosophila melanogaster tham gia vào quá trình chuyển hóa uracil-DNA. Các protein được khảo sát bao gồm yếu tố thoái hóa uracil-DNA (UDE) mới được xác định, dUTPase, và hai enzyme uracil-DNA glycosylase. Phân tích dự đoán bằng phương pháp in silico đã xác định hai chuỗi NLS giả định trong UDE và một chuỗi NLS tiềm năng trong dUTPase. Thí nghiệm sử dụng các cấu trúc lặp lại YFP cho thấy rằng trong UDE, chỉ một trong các chuỗi NLS giả định là cần thiết cho việc định vị hạt nhân hiệu quả, tương tự như NLS mẫu của SV40 T-antigen. Một chuỗi NLS tương tự cũng được tìm thấy trong thymine-DNA glycosylase của Drosophila, nhưng không có NLS nào được dự đoán ở uracil-DNA glycosylase đơn chức. Đối với dUTPase, một đoạn chuỗi axit amin PAAKKMKID đã được đặc trưng, với sự tham gia của bộ ba PAA và bộ đôi ID trong việc định vị hạt nhân.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Đặc tính hóa các đoạn NLS
• Sắp xếp dưới tế bào của UDE
• Sắp xếp dưới tế bào của các dạng UDE bị cắt cụt C-terminal
• Sắp xếp dưới tế bào của UDE chứa các đột biến điểm cụ thể trong chuỗi NLS
• Tiềm năng sắp xếp dưới tế bào của các chuỗi NLS UDE NLS1 và NLS2 dự đoán
• Dự đoán tín hiệu NLS ở các uracil-DNA glycosylase của Drosophila
• Phân bố dưới tế bào của các dạng dUTPase của D. melanogaster
• Tiềm năng định vị hạt nhân của chuỗi NLS dUTPase và các dẫn xuất bị cắt cụt của nó
• Mô hình cấu trúc của đoạn NLS dUTPase của Drosophila trong phức hợp với protein importin α
• Kết luận
• Thủ tục thí nghiệm