Angiogenin prevents serum withdrawal-induced apoptosis of P19 embryonal carcinoma cells

Characterization of the Anti-Apoptotic Activity of Angiogenin

Tác giả: Shuping Li, Wenhao Yu, Hiroko Kishikawa, Guo-fu Hu

Lĩnh vực: Pathology, Harvard Medical School, Boston, MA, USA

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này khảo sát hoạt tính chống lại sự chết theo chương trình của angiogenin (ANG) trên tế bào ung thư biểu mô phôi P19. Angiogenin, một protein 14 kDa ban đầu được xác định là có khả năng sinh mạch, gần đây đã được chứng minh là tác động lên cả tế bào nội mô và tế bào thần kinh. Các đột biến mất chức năng trong vùng mã hóa gen ANG đã được xác định ở bệnh nhân xơ cứng teo cơ một bên (ALS). Angiogenin đã được chứng minh là kiểm soát sự sống còn của tế bào thần kinh vận động và bảo vệ tế bào thần kinh khỏi quá trình chết theo chương trình trong các điều kiện căng thẳng khác nhau. Trong bài báo này, chúng tôi đã phân tích hoạt tính chống chết theo chương trình của angiogenin trong tế bào ung thư biểu mô phôi P19 đa năng. Angiogenin ngăn chặn quá trình chết theo chương trình gây ra do rút serum. Angiogenin điều hòa tăng các gen chống chết theo chương trình, bao gồm Bag1, Bcl-2, Hells, Nf-kb và Ripk1, đồng thời điều hòa giảm các gen gây chết theo chương trình như Bak1, Tnf, Tnfr, Trafl và Trp63. Việc làm giảm biểu hiện Bcl-2 phần lớn làm mất hoạt tính chống chết theo chương trình của angiogenin, trong khi việc ức chế hoạt tính Nf-kb dẫn đến sự ức chế một phần, nhưng đáng kể, hoạt tính bảo vệ của angiogenin. Do đó, angiogenin ngăn chặn cái chết tế bào do căng thẳng gây ra thông qua cả hai con đường Bcl-2 và Nf-kb.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Kết quả
• ANG ngăn chặn tế bào P19 chết theo chương trình do rút serum
• ANG điều hòa biểu hiện của các gen liên quan đến chết theo chương trình
• ANG tăng mức độ protein Bcl-2, kích thích giải phóng cytochrome c và làm giảm hoạt tính caspase
• Hoạt tính chống chết theo chương trình của ANG phụ thuộc vào Bcl-2
• ANG điều hòa tăng Nf-kb và tăng cường sự chuyển vị hạt nhân của nó
• Ức chế Nf-kb bởi chất siêu ức chế IkB-a (IKBSR) làm suy giảm một phần hoạt tính chống chết theo chương trình của ANG
• Thảo luận
• Thủ tục thực nghiệm
• ANG và nuôi cấy tế bào
• Phân tích phân mảnh DNA
• Nhuộm EB/AO các tế bào chết theo chương trình
• Phân tích tế bào dòng chảy
• Giải phóng Cytochrome c
• Hoạt tính Caspase 3/7
• Phân tích mảng PCR apoptosis
• RT-PCR định lượng thời gian thực
• Western blotting
• Chuyển nhiễm siRNA Bcl-2 và IKBSR
• Lời cảm ơn
• Tài liệu tham khảo